[发明专利]一种青海云杉成熟合子胚愈伤组织诱导的培养基及方法

权利要求书

1.一种青海云杉成熟合子胚愈伤组织诱导的培养基，其特征在于，该愈伤组织诱导培养基为S培养基+2,4-D 1mg·L^-1+6-BA 2mg·L^-1+KT 4mg·L^-1，该培养基含34g·L^-1蔗糖，8g·L^-1琼脂，0.5g·L^-1水解酪蛋白，pH为5.8。

2.一种青海云杉成熟合子胚愈伤组织的诱导方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)培养基配制：按S培养基配方配置基本培养基，然后添加1mg·L^-1的2,4-D、2mg·L^-1的6-BA、4mg·L^-1的KT和0.5g·L^-1的水解酪蛋白，以及34g·L^-1蔗糖和8g·L^-1琼脂，pH为5.8，分装灭菌后备用；

(2)外植体消毒：将青海云杉种子于水中浸泡10-15h后，用镊子剥去种皮；然后，用75％酒精对去皮的种子进行表面消毒；再用0.1％HgCl₂对种子深度灭菌，然后用无菌水冲洗；最后，在无菌条件下，用无菌滤纸吸干种子表面水分；

(3)种胚分离：在无菌条件下，用消过毒的尖头镊子夹掉种子胚根段的尖端部分，然后用镊子压种子中部得到种胚；

(4)接种和培养：在无菌条件下，将种胚平行接种于培养基的表面，置于25℃条件下暗培养；

(5)愈伤组织的增殖：愈伤组织形成后，将之转接于诱导培养基，进行增殖培养。

3.根据权利要求2所述的一种青海云杉成熟合子胚愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述步骤(2)中，将青海云杉种子于水中浸泡12h。

4.根据权利要求2所述的一种青海云杉成熟合子胚愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述步骤(2)中，用酒精对去皮的种子进行表面消毒的时间为5min。

5.根据权利要求2所述的一种青海云杉成熟合子胚愈伤组织的诱导方法，其特征在于，所述步骤(2)中，用无菌水冲洗5次，每次5min。