[发明专利]一种以竹笋壳降解产物为诱导剂培养霉菌生产纤维素酶的方法

权利要求书

1.一种以竹笋壳降解产物为诱导剂培养霉菌生产纤维素酶的方法，其特征在于操作步骤如下：

（1）用竹笋壳制作诱导剂

（1.1）竹笋壳干粉过40目筛，按重量比4:1将竹笋壳干粉和麸皮混和，再加入干物质重量2倍的自来水拌匀，灭菌，制成发酵底料；

（1.2）在发酵底料中接入平菇菌种，接种量为发酵底料重量的5%，温度28±2℃条件下，培养15 d，当菌丝长密长实，发酵完成；发酵底料中的竹笋壳干粉被部分降解，成为平菇发酵料；

（1.3）将平菇发酵料在80℃温度下烘干至恒重，粉碎，得到纤维素酶诱导粉剂；

（1.4）将纤维素酶诱导粉剂和自来水按重量比1:10混和，加热，沸水浸提20 min，静置冷却，取上层清液蒸发浓缩制成纤维素酶诱导水剂，纤维素酶诱导水剂的体积是原液体积的1/10；

（2）配制霉菌液体发酵培养基，培养基配方如下：

葡萄糖2.0 g、氯化钠0.05 g、磷酸二氢钾0.1 g、七水硫酸镁0.05 g、硫酸铵0.2 g、纤维素酶诱导水剂10 mL和水90 mL；

（3）霉菌好氧发酵

在霉菌液体发酵培养基中接入黑曲霉孢子悬液，好氧恒温发酵，得到发酵液；

霉菌好氧发酵的工艺条件：摇瓶发酵时，100 mL霉菌液体发酵培养基中接入浓度（1.10～1.20）×10⁶个/mL 的1 mL黑曲霉孢子悬液，恒温摇床培养；转速180 r/min、温度32℃、发酵时间72 h；

（4）发酵液后处理

将发酵液经过滤或离心处理，分离出其中的菌丝球，所得清液中纤维素酶活不低于4U/mL，将清液浓缩，-40℃真空冷冻干燥48 h，制成纤维素酶粉剂；或室温下真空杯过滤浓缩，滤膜透过分子量小于500 Da，制成纤维素酶浓缩液。

2.根据权利要求1所述的一种以竹笋壳降解产物为诱导剂培养霉菌生产纤维素酶的方法，其特征在于：步骤（3）中霉菌好氧发酵的工艺条件：5 L发酵罐发酵时，2 L霉菌液体发酵培养基中接入浓度（1.10～1.20）×10⁶个/mL 的20 mL黑曲霉孢子悬液，搅拌转速800 r/min、通气量0.5 L/min、温度32℃、发酵时间72 h。