[发明专利]用于鉴别伪狂犬病病毒株的三重荧光定量PCR的引物、探针和试剂盒有效
| 申请号： | 201610202313.4 | 申请日： | 2016-04-01 |
| 公开（公告）号： | CN105779650B | 公开（公告）日： | 2019-09-24 |
| 发明（设计）人： | 仇华吉;孟星宇;罗玉子;孙元 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京思元知识产权代理事务所(普通合伙) 11598 | 代理人： | 余光军 |
| 地址： | 150001 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 鉴别 狂犬病 病毒 三重 荧光 定量 pcr 引物 探针 试剂盒 | ||
1.用于鉴别伪狂犬病病毒经典株、变异株和Bartha-K61疫苗株的三重荧光定量PCR的引物及探针，其特征在于，所述引物包括：SEQ ID No.8和SEQ ID No.9所示核苷酸序列组成的引物对1，以及SEQ ID No.14和SEQ ID No.15所示核苷酸序列组成的引物对4；
所述探针包括：SEQ ID No.1、SEQ ID No.4和SEQ ID No.6所示核苷酸序列。
2.按照权利要求1所述的引物及探针，其特征在于：核苷酸序列为SEQ ID No.1所示的探针的5′端标记有FAM荧光报告基团，3′端标记有BHQ1荧光淬灭基团；
核苷酸序列为SEQ ID No.4所示的探针的5′端标记有HEX荧光报告基团，3′端标记有BHQ1荧光淬灭基团；
核苷酸序列为SEQ ID No.6所示的探针的5′端标记有Cy5荧光报告基团，3′端标记有BHQ3荧光淬灭基团。
3.按照权利要求1所述的引物及探针，其特征在于，所述伪狂犬病病毒经典株包括：伪狂犬病病毒SC株或Min-A株；所述变异株包括：伪狂犬病病毒TJ株、HLJMDJ2013株、HeBLP2014株或BJKJZ2015株。
4.权利要求1所述的引物及探针在制备鉴别伪狂犬病病毒经典株、变异株和Bartha-K61疫苗株的试剂或材料中的应用。
5.按照权利要求4所述的应用，其特征在于：所述伪狂犬病病毒经典株包括：伪狂犬病病毒SC株或Min-A株；所述变异株包括：伪狂犬病病毒TJ株、HLJMDJ2013株、HeBLP2014株或BJKJZ2015株。
6.一种鉴别伪狂犬病病毒经典株、变异株和Bartha-K61疫苗株的三重荧光定量PCR检测试剂盒，包括：引物、探针、Premix Ex TaqProbe qPCR和双蒸水；其特征在于，所述引物和探针为权利要求1所述的引物及探针。
7.按照权利要求6所述的三重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，还包括二甲基亚砜。
8.按照权利要求7所述的三重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述二甲基亚砜的用量为由引物、探针、Premix Ex Taq Probe qPCR、双蒸水、待测基因组DNA和二甲基亚砜组成的三重荧光定量PCR反应体系总体积的2.5％-10％。
9.按照权利要求8所述的三重荧光定量PCR检测试剂盒，其特征在于，所述二甲基亚砜的用量为由引物、探针、Premix Ex TaqProbe qPCR、双蒸水、待测基因组DNA和二甲基亚砜组成的三重荧光定量PCR反应体系总体积的5％。
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