[发明专利]LIM2基因在检测先天性CCMC中的应用

说明书

技术领域

本发明属于基因诊断与产前基因诊断的相关技术领域，具体涉及晶状体内 膜蛋白2(LIM2)在制备检测先天性白内障-小角膜综合征(CCMC)基因诊断制品 中的应用。

发明背景

先天性白内障是导致儿童低视力和致盲的常见眼病，发病率约为 0.01％～0.06％，其中约50％与遗传有关，其遗传方式以常染色体显性遗传最为常 见。先天性白内障可独立发生，也可作为眼部或全身综合征的伴发症状，其中 12％-18％的先天性白内障患者常发生合并小角膜症状。白内障-小角膜综合征 (Cataract-microcorneasyndrome,CCMC,OMIM116200)是一种先天发育异常性 眼病，常累及双眼，表现为不同表型的白内障及角膜横径小于10mm，常伴发眼 前节发育不良，如虹膜缺损、Peters异常、瞳孔异位及眼球震颤等，这些多发畸 形常使大多数患者丧失视力，是先天性致盲的重要原因之一。并且和单纯先天 性白内障相比，伴发小角膜的患者更易患青光眼，并造成不可逆转的视觉损害。 目前对于CCMC治疗手段有限、致盲率很高，给全社会带来沉重的经济负担。

先天性CCMC的病因及病理机制尚不清楚，目前世界上研究较少。国内外 的遗传学研究结果表明该病很大程度上是由于遗传因素导致的。迄今为止，已 有7个致病基因被证实(详见表1)。

表1：白内障-小角膜综合征致病基因定位及克隆情况

CCMC具有显著的遗传异质性，存在多个候选致病基因。到目前为止对 CCMC的致病基因的了解仍然有限，迄今为止7个已知基因仅能解释不到30％ 的患者的发病。这已经成为CCMC的发病机制的研究以及针对病因的诊断和治 疗研究的瓶颈。这种现状促使进一步去发现和了解该病新的致病基因，为后续 的基因诊断、产前诊断及基因治疗提供基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种LIM2基因在制备检测先天性白内障-小角膜综合征 (CCMC)诊断制品中的应用，从而弥补现有技术的不足。

申请人发现了一个3代呈常染色体显性遗传的CCMC家系，经过候选基因 测序，排除了已知的7个候选基因突变致病的可能；同时，进一步对该家系的 核心成员进行了外显子组测序，找到了该家系的致病基因晶状体内膜蛋白2 (LIM2)，从而促成了本发明。

本发明首先提供LIM2基因新的用途，是在制备用于检测先天性白内障-小 角膜综合征(CCMC)诊断制品中的应用；

本发明还提供一种用于检测先天性白内障-小角膜综合征(CCMC)的引物对， 所述的引物对的上下游引物序列为SEQIDNO:1-10，其引物信息如下：

本发明还提供一种用于检测先天性白内障-小角膜综合征(CCMC)的试剂盒， 包含有上述的引物对中的任一种或几种。

本发明还提供一种与先天性白内障-小角膜综合征(CCMC)疾病相关的SNP 位点,为LIM2基因编码区域由起始密码子起第68位,其碱基为T或G；

本发明提供了LIM2基因的新的用途，从而提供了一种有效的进行先天性 CCMC疾病基因诊断、产前基因筛查及遗传咨询的途径，应用效果表明本发明 所提供的基因的SNP位点及检测引物可以有效的用于临床患者及胎儿绒毛或羊 水进行LIM2基因突变位点的快速检测。

具体实施方式

本发明的申请人在一个先天性的CCMC家系中发现LIM2基因的突变位点 从而促成了本发明。

LIM2基因由8052个核苷酸碱基组成，位于19q13.41，可转录成大约875bp 的mRNA(NM_001161748.1)，直接翻译形成173个氨基酸组成的蛋白质。

下面结合实施例对本发明进行详细的描述。

实施例1：从先天性CCMC家系中筛选LIM2基因的突变位点

1、提取外周血基因组DNA：

在符合国家相关政策规定，并在取样对象同意的基础上，抽取第一个家系 成员外周静脉血2-5ml，放入EDTA抗凝管内，-80℃冻存备用；冻存的EDTA 抗凝血在室温融化后，取500μL放于离心管，加入等体积TE(pH8.0)，混匀， 4℃，10000rpm离心10分钟，弃上清。