[发明专利]一种产细菌素的屎肠球菌及其应用

说明书

本发明涉及一种产细菌素的屎肠球菌菌株，该菌株的保藏名称为：屎肠球菌(Enterococcus faecium)R1，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期：2016年1月20日，保藏号：CGMCC No.12085。该菌株来源为农家传统发酵豆酱，在MRS琼脂培养基中呈小于1mm的圆形或椭圆形的白色光滑不透明菌落；在MRS液体培养基中呈均匀浑浊生长；电镜下菌体为球型，成对或链状排列，革兰氏染色呈阳性。本发明的菌株对抗生素敏感，不含毒力基因，属于安全菌株。其产生的细菌素为肠球菌素P，在酸性条件下稳定，具有很好的热稳定性，对常见的肠道致病菌具有良好的抑菌效果。

技术领域

本发明属于食品生物技术领域，特别是涉及一种产细菌素的屎肠球菌及其应用。

背景技术

近年来食品安全问题频繁爆发，其主要原因就是致病菌和腐败微生物的生长繁殖。食品源病原微生物可引起人类疾病，WHO估测全世界每年有成千上万例食品源疾病，危害人们的健康。为抑制病原微生物的生长繁殖，化学防腐剂的添加成为解决问题的方式之一。然而，化学防腐剂的滥用，使其在饲料及是食品中大量残留，对禽畜类及人类身体健康产生严重威胁。此时生物防腐剂应运而生，乳酸链球菌素Nisin是从乳酸菌中提取的天然食品防腐剂，其安全无毒的特点很大程度上避免了化学防腐剂所产生的危害，已经广泛应用在乳制品、肉制品和饮料等食品保藏中。但最近研究发现，Nisin分子中的“羊毛硫氨酸环”特征结构能够抑制体内的益生菌，人们开始对此产生怀疑和担忧。因此，寻找广谱、高效、稳定和更为安全的天然食品防腐剂是保障食品安全的关键和必然趋势。

传统发酵豆酱具有丰富的营养价值和乳酸菌资源，其中存在着大量的屎肠球菌(Enterococcus faecium)资源。屎肠球菌作为乳酸菌的一种，具有良好的生物学特性。屎肠球菌是目前农业部令(2013年2045号)动物微生物饲料添加剂栏所允许使用的益生菌种类，研究表明该菌所产生的类细菌素可作为生物防腐剂抑制腐败菌和致病菌的生长繁殖，屎肠球菌产生的类细菌素具有分子质量小、热稳定性强等特点，具有良好的应用前景。

发明内容

针对上述存在的技术问题，本发明提供一种产细菌素的屎肠球菌(Enterococcusfaecium)R1及其应用，该菌株对模拟人工消化液有很好的耐受性，该菌株对抗生素敏感，不含毒力基因，属于安全菌株。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种产细菌素的屎肠球菌菌 株，该菌株的保藏名称为：屎肠球菌(Enterococcus faecium)R1，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址:北京市朝阳区北辰西路1号院，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101，保藏日期：2016年1月20日，保藏号：CGMCC No.12085。

本发明中，所述产细菌素的屎肠球菌菌株，所述屎肠球菌菌株来源于农家传统发酵豆酱中，在MRS琼脂培养基中呈小于1mm的圆形或椭圆形的白色光滑不透明菌落；在MRS液体培养基中均匀浑浊生长；电镜下菌体为球型，成对或链状排列，革兰氏染色阳性。

本发明中，所述MRS琼脂培养基为：在MRS液体培养基中加入2％的琼脂粉；所述MRS液体培养基为：蛋白胨10g，牛肉浸膏8g，酵母粉4g，葡萄糖20g，无水乙酸钠5g，吐温1g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸铵2g，七水硫酸镁0.58g，一水硫酸锰0.25g，蒸馏水1000mL，pH值6.5。

本发明中，所述产细菌素的屎肠球菌的选育方法，使用MRS琼脂培养基从农家传统发酵豆酱中筛选分离出乳酸菌菌株，通过平板划线分离纯化出乳酸菌菌株；以常见致病菌为指示菌，应用牛津杯法，筛选出产细菌素的乳酸菌，经16S rDNA测序分析，得到屎肠球菌。

所述产细菌素的屎肠球菌的选育方法，所述从农家传统发酵豆酱中筛选分离出乳酸菌菌株是采用平板稀释法，将稀释后豆酱样品涂布在MRS固体培养基上，37℃培养24h；挑取疑似乳酸菌形态单菌落于MRS液体培养基中，37℃培养24h。