[发明专利]CIK细胞扩增方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种CIK细胞扩增方法。

背景技术

细胞免疫治疗是一种新兴的、具有显著疗效的全新的抗肿瘤治疗方法， 弥补了传统的手术、放疗、化疗的弊端，已经被公认为二十一世纪肿瘤综合 治疗模式中最活跃、最有发展前途的一种治疗手段,也是世界目前唯一有希望 完全消灭肿瘤细胞的治疗手段。免疫细胞是指参与免疫应答或与免疫应答相 关的细胞，包括淋巴细胞、树突状细胞、单核/巨噬细胞、粒细胞、肥大细胞 等。

CIK(cytokine-inducedkiller，中文名：[自体细胞免疫疗法]多种细胞因 子诱导的杀伤细胞)是单个核细胞在抗CD3单克隆抗体和多种细胞因子的 作用下培养获得的一群异质细胞群，其中CD3⁺，CD56⁺淋巴细胞是主要效 应细胞。CIK可直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞；诱导肿瘤细胞凋亡； 通过释放大量炎性细胞因子抑制或杀伤肿瘤细胞。CIK细胞具有增殖速度 快、杀瘤活性高、杀瘤谱广、对多重耐药肿瘤细胞同样敏感、对正常骨髓 造血前体细胞细胞毒性小等特点，是目前发现的杀伤肿瘤细胞活性强，适 合临床应用的一种理想的效应细胞，但这种效应细胞在正常外周血中极其 少见，仅为1％～5％。由此可见，就免疫细胞治疗来说，如何获得足够 数量的、免疫活性强的效应细胞是保证治疗效果的必备条件。

CIK细胞能通过体外诱导而大量增殖，常规的CIK制备方法是将分离 的外周血单个核细胞加入培养液中，通过添加细胞生长因子进行刺激诱导， 最终获得一定数量的CIK细胞，但最终获得的CD3⁺和CD56⁺CIK细胞数 量及杀伤活性都不够理想。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术中CIK细胞扩增存在扩增 效率差，细胞杀伤活性低等缺陷，提供一种能够提高CIK细胞扩增效率、尤 其是提高CD3⁺和CD56⁺CIK细胞数量，提高杀伤活性的CIK细胞扩增方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种CIK细胞扩增方 法，包括以下步骤：

获取单个核细胞，采用CIK细胞诱导液对所述单个核细胞进行诱导培养 至收获CIK细胞；

将所述CIK细胞置于无血清培养基中进行体外扩增培养；

其中，所述无血清培养基中含有PPP、IL-2、IL-12和IL-27。

在本发明提供的CIK细胞扩增方法中，所述体外扩增培养过程中，每2～3 天补加含有PPP、IL-2、IL-12和IL-27的无血清培养基。

在本发明提供的CIK细胞扩增方法中，所述无血清培养基为AIM-V培养 基。

在本发明提供的CIK细胞扩增方法中，所述无血清培养基中，PPP的体 积分数为3～5％，IL-2的浓度为800～1200IU/ml，IL-12的浓度为 800～1200IU/ml，IL-27的浓度为5～30ng/ml。

在本发明提供的CIK细胞扩增方法中，所述无血清培养基中，IL-27的浓 度为15～25ng/ml。

在本发明提供的CIK细胞扩增方法中，所述无血清培养基中，PPP的体 积分数为4％，IL-2的浓度为1000IU/ml，IL-12的浓度为1000IU/ml，IL-27 的浓度为18ng/ml。

在本发明提供的CIK细胞扩增方法中，所述CIK细胞诱导剂包括IFN-γ、 抗CD3单抗和IL-1α。

在本发明提供的CIK细胞扩增方法中，所述CIK细胞诱导剂中，IFN-γ 的浓度为800～1200IU/ml、抗CD3单抗的浓度为10-150ng/ml和IL-1α的浓 度为10-50μg/ml。

实施本发明提供的CIK扩增方法，可以达到以下有益效果：不仅能够提 高CIK细胞的扩增效率及成熟率，而且能够提高CD3⁺和CD56⁺CIK细胞数 量，提高杀伤活性。

具体实施方式

本发明提供的CIK细胞扩增方法，包括以下步骤：

S1、获取单个核细胞；

S2、用CIK细胞诱导剂对单个核细胞进行诱导培养18～36小时，至收获 原代CIK细胞；