[发明专利]一种快速检测–α2.4缺失型α地贫等位基因的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医学检测技术领域，具体涉及一种快速检测-α^2.4缺失型α地贫等位基因的试剂盒。

背景技术

申请人在日常工作中，发现-α^2.4缺失型α地贫等位基因在广西有一定的分布几率(PangWR,SunL,LongJ,WengXJ,YeXH,WangJJ,LiaoY,TangWJ,FanZQ,WuSP,SongCL,WeiXY,ZhangCH.Identificationofthe-α^2.4DeletioninOneFamilyandinOneHbHDiseasePatientinGuangxi,People'sRepublicofChina.[J].Hemoglobin.2016Mar17:1-4.)，该基因型与东南亚缺失型杂合会导致HbH病，为降低该基因型的漏诊，有必要需建立一种可以快速检测-α^2.4等位基因的检测试剂盒。

Taqman-PCR(荧光水解探针PCR)技术是一种广泛用于医学检测的技术，其优势在于检测精度高，通量大，且操作快速、简单，且大部分医院均已部署相关仪器设备。但目前尚未见有以荧光水解探针PCR技术开发快速快速检测-α^2.4缺失型α地贫等位基因的试剂盒的相关报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种基于水解探针技术的快速检测-α^2.4缺失型α地贫等位基因的试剂盒。该试剂盒对-α^2.4等位基因检测具有高度的灵敏性、稳定性、准确性以及较高的特异性。

本发明所述的快速检测-α^2.4缺失型α地贫等位基因的试剂盒，包括扩增引物和荧光探针，其特征在于：

所述的扩增引物为一对可以扩增α-珠蛋白基因簇中-α^2.4等位基因的特征序列的引物2.4-F和2.4-R，其中：

2.4-F:5’-CAGTCACACAAACTGTGAGTCCA-3’；

2.4-R:5’-GACATCACAAACGCAGGCAG-3’；

所述的荧光探针为一条特异性检测2.4-F和2.4-R扩增产物的荧光探针2.4-Prob，具体为：

2.4-Prob:5’-HEX-GGCCTGCCATAGGTGTTTACCAAGGG-BHQ-1-3’。

本发明所述的荧光探针中，HEX指六氯-6-甲基荧光素，BHQ-1指荧光淬灭基团。

本发明所述的快速检测-α^2.4缺失型α地贫等位基因的试剂盒还包括一些现有试剂盒中常规且必须的组分，如缓冲液、酶液、MgCl₂和dNTP等，具体地，酶液即为DNA聚合酶，具体可采用康为世纪所生产的GoldStarTaqDNAPolymerase，缓冲液为与GoldStarTaqDNAPolymerase配套的缓冲液。

采用上述试剂盒快速检测-α^2.4缺失型α地贫等位基因的方法，包括以下步骤：

1)抽提样本基因组DNA，制备DNA模板；

2)配制反应体系，具体为：

将引物2.4-F和2.4-R、荧光探针2.4-Prob以及PCR缓冲液、酶液、MgCl₂、dNTP、水和DNA模板配制成反应体系；

3)样本检测：分别将配制的反应体系进行PCR扩增，记录每个PCR反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环次数Cq(Cq值的大小可以反映所检测模板数的多少)；

4)数据分析及结果判定：根据实时荧光PCR仪自带的分析软件分析判读结果，当HEX通道有Cq值读数时，则表示该样本携带-α^2.4等位基因；当HEX通道没有Cq值读数时，则表示该样本不携带-α^2.4等位基因。

上述方法的步骤1)中，采用现有常规方法制备DNA模板。

上述方法的步骤2)中，反应体系中各组分的浓度优选为：待检测DNA：1～3ng/μL；各引物：0.3～0.5μmol/L；探针浓度为0.3～0.5μmol/L；DNA模板：20～200ng；镁离子：1.5～1.9mmol/L；反应体系的终体积优选为20μL。

上述方法的步骤3)中，PCR扩增条件为：95℃预变性8～12分钟，然后95℃15～30秒，60℃退火50～70秒，39～49个循环，于60℃退火步骤末采集荧光信号。

与现有技术相比，本发明的特点在于：