[发明专利]一种鸡新城疫弱毒株及其在制备鸡新城疫油乳剂灭活疫苗的应用

说明书

技术领域：

本发明涉及鸡新城疫的病原以及预防，特别是一种鸡新城疫弱毒株及其在制备鸡新城 疫油乳剂灭活疫苗的应用。

背景技术：

新城疫(NewcastleDisease，ND)，又称亚洲鸡瘟、伪鸡瘟等，是发生于鸡、鸽、鹌鹑、火 鸡等家禽和野生禽类的一种急性、败血性和高度接触性传染病，是世界动物卫生组织（OIE） 规定的法定必报传染病之一。其病原是新城疫病毒(NewcastleDiseaseVirus，NDV)。NDV 属于副黏病毒科，副黏病毒亚科，腮腺炎病毒属（Rubulavirus）。NDV只有1个血清型，但通过 遗传发生分析，可将不同地区的流行毒株或疫苗株分成若干个基因型或抗原群。近年来，我 国流行的主要毒株属于NDVⅦ、Ⅷ、Ⅸ基因型，其中基因Ⅶ型是主要流行毒株。基因Ⅶ型包 括Ⅶa、Ⅶb、Ⅶc、Ⅶd、Ⅶe5个亚型，我国流行的主要是Ⅶd、Ⅶe亚型。新城疫不仅给家禽养 殖业带来严重的经济损失，而且还严重影响禽和禽类相关产品的国际贸易。因此，世界各国 对该病的发生流行均采取非常严格的防控措施。1990年代以来，我国新城疫在疫苗免疫鸡 群中的发生逐渐严重，主要特征是产蛋量大幅下降以及死亡率低、抗体滴度高，这种非典型 新城疫严重危害了鸡的生产性能，给养禽业造成了巨大损失。

发明内容：

本发明的目的是提供一种低致病力的鸡新城疫病毒，该病毒具有免疫原性好，安全的 特性。

本发明的技术方案是，一种鸡新城疫弱毒株，藏于中国微生物菌种保藏管理委员 会普通微生物中心，微生物保藏编号为CGMCCNo.11290。

保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

保藏日期：2015年10月19日。

分类命名：鸡新城疫病毒。

一种鸡新城疫弱毒株在制备鸡新城疫弱毒活疫苗中的应用。

一种鸡新城疫弱毒株由其制备鸡新城疫油乳剂灭活疫苗的制备，步骤包括：

（1）以权力1要求所述的弱毒株为种毒，PBS缓冲液等量稀释后接种鸡胚尿囊腔，每胚 0.1-0.2mL，37℃孵育，孵育96h后收获尿囊液，计量加入0.1%的甲醛溶液灭活，即得抗原液；

（2）以白油和Span-80按94:6的比例混合后，加2%的硬脂酸铝，搅拌至透明，高压灭菌即 得油相；

（3）抗原液和灭菌后的Tween-80按96:4比例混合，充分振摇，使Tween-80完全溶解，即 为水相；

（4）油相和水相按照2份:1份混合乳化，即油相2份注入胶体磨中，打开开关搅动油相， 同时缓慢加入水相1份，搅拌转速由慢到快充分乳化，即完成制备。

本发明分离得到的毒株是一株免疫原性好、生产性能优良、适宜大规模生产的种 毒。由该毒株制备的活疫苗产品质量合格，具备产业化生产的条件。

具体实施方式：

实施例1，

（1）以微生物保藏编号为CGMCCNo.11290的弱毒株为种毒，PBS缓冲液等量稀释后接种 鸡胚尿囊腔，每胚0.1-0.2mL，37℃孵育，孵育96h后收获尿囊液，孵育96h后收获尿囊液，计 量加入0.1%的甲醛溶液灭活，即得抗原液；

（2）以白油和Span-80按94:6的比例混合后，加2%的硬脂酸铝，搅拌至透明，高压灭菌即 得油相；

（3）抗原液和灭菌后的Tween-80按96:4比例混合，充分振摇，使Tween-80完全溶解，即 为水相；

（4）油相和水相按照2份:1份混合乳化，即油相2份注入胶体磨中，打开开关搅动油相， 同时缓慢加入水相1份，搅拌转速由慢到快充分乳化，即完成制备。

具体实例：病料采集及处理

病料来自河南省卫辉市某蛋鸡场，选择自然发病死亡6h内或频死鸡，无菌采集气管组 织块、肝脏、肾脏、脑，加10倍生理盐水，在研钵内反复研磨成乳剂，4000r/min离心10min，反 复2次。取上清液向其中按1%的量加入双抗，于4℃冰箱内过夜保存。

2鸡胚接种及尿囊液的收集

无菌条件下，将上清液接种于10日龄SPF鸡胚尿囊腔，接种量为0.2mL/胚。将接种的鸡 胚置37℃恒温箱孵育。每4h照蛋一次，将死亡鸡胚或垂死鸡胚取出置4℃冰箱保存，7d后将 所有鸡胚取出置于4℃冷却，收集尿囊液。重复传3代，收尿囊液4000r/min离心15min，收上 清液冷冻保存。