[发明专利]一种新型甜味剂的制备方法在审
| 申请号： | 201610183963.9 | 申请日： | 2016-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN105732740A | 公开（公告）日： | 2016-07-06 |
| 发明（设计）人： | 朱惠霖;丁雪峰;刘怡冰 | 申请（专利权）人： | 南京诺云生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07H15/256 | 分类号： | C07H15/256;C07H1/00;C12P19/56;C12P19/18 |
| 代理公司： | 常州佰业腾飞专利代理事务所(普通合伙) 32231 | 代理人： | 翁斌 |
| 地址： | 210000 江苏省南*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 新型 甜味剂 制备 方法 | ||
1.一种化合物(Ⅴ)的制备方法，其特征在于：以化合物(Ⅲ)为原料，通过碱水解生产化合物(Ⅴ)，所述制备方法如下：
。
2.根据权利要求1所述的化合物(Ⅴ)的制备方法，其特征在于：所述化合物(Ⅲ)由如下方法制得，以化合物(Ⅰ)为底物，使所述底物在葡萄糖基供体存在下，在UDP-葡萄糖基转移酶的催化作用下反应生成化合物(Ⅲ)，所述制备方法如下：
。
3.根据权利要求2所述的化合物(Ⅴ)的制备方法，其特征在于：所述的UDP-葡萄糖基转移酶由南京诺云生物科技有限公司发酵生产部提供。
4.根据权利要求2所述的化合物(Ⅴ)的制备方法，其特征在于：在微生物宿主中表达UDP-葡萄糖基转移酶，所述微生物宿主选自大肠杆菌、芽胞杆菌、酵母、曲霉菌或毕赤酵母。
5.根据权利要求2所述的化合物(Ⅴ)的制备方法，其特征在于：取UDP-葡萄糖基转移酶30mg，用无菌水重悬细胞，并于冰浴中超声波破碎细胞，即为反应所用的粗酶液；精密称取样品，配制成1.85ml体系，其中化合物(Ⅰ)的终浓度2.0g/L、UDP-葡萄糖为2.70g/L，并加入0.286g/L的MgCl2；然后加入粗酶液，并加入Tris-HCl缓冲液pH8.0至体系为1.85ml，起始反应；25℃恒温摇床以150rpm振荡30h，100℃煮沸终止反应，13000g离心10min，取上清作为样品，利用大孔树脂对样品进行初提纯，并使用LC-MS方法检测提纯的化合物的纯度。
6.根据权利要求1所述的化合物(Ⅴ)的制备方法，其特征在于：所述的碱性水解条件为添加了氢氧化钾，甲醇和水。
7.根据权利要求1所述的化合物(Ⅴ)的制备方法，其特征在于：所述反应中氢氧化钾的浓度为0.1g/L，甲醇的浓度为50％。
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