[发明专利]一种从硫酸软骨素粗提物中去除硫酸角质素的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种从硫酸软骨素粗提物中去除硫酸角质素的方法。本发明在硫酸软骨素粗提物溶液中加入氢氧化钠溶液反应后，加入盐酸调节PH值，过滤得滤液，在滤液中加入氯化钠调节溶液电导率为45‑48ms/cm，然后加入乙醇溶液，控制乙醇溶液流速为10‑15mL/（L·min），使硫酸软骨素沉淀,过滤得沉淀物，沉淀物经脱水后干燥得硫酸软骨素成品。本发明工艺条件容易控制，成本低，操作简单，对实验仪器要求低，彻底解决了从硫酸软骨素中去除硫酸角质素困难，难以工业化生产的问题。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种从硫酸软骨素粗提物中去除硫酸角质素的方法。

背景技术

硫酸软骨素(CS)是以动物（猪、牛、马、羊、鸡、鲨鱼等）的软骨为原料的一种高分子酸性粘多糖，其分子结构为β-D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖形成的重复二糖单位所组成的多糖链。它是一种白色或微黄色粉末，吸水性强，易溶于水而成粘稠液体，不溶于酒精、丙酮、乙醚和氯仿等有机溶剂，其盐类对热较稳定。

硫酸角质素(KS)是糖胺聚糖的一种，该类多糖由不同硫酸化修饰的N-乙酰氨基葡萄糖和D-半乳糖二糖重复单元组成，KS以蛋白多糖形式存在于动物的角膜、椎间板、软骨和动脉中，研究发现，KS大量存在于鲨鱼等软骨鱼类和鲸鱼、牛等哺乳动物的软骨和角膜等中，KS通常与硫酸软骨素(CS)混合存在,但二者含量不同，如牛等哺乳动物软骨提取物中CS含量很高，而鲨鱼等软骨类糖胺聚糖中KS含量较高，要想检测硫酸软骨素的结构和含量，就要对CS进行分离，然后完全降解为二糖，再对二糖进行检测。目前对硫酸软骨素和硫酸角质素的分离均采用离子交换色谱法,由于不同糖胺聚糖的分子结构不同,所携带的电荷量不同,在离子交换树脂上的保留行为不同,因此可采用不同盐浓度洗脱而得以分离。专利CN201310695187将硫酸软骨素和硫酸角质素混合物溶于去离子水，经阴离子交换柱分离，用不同浓度氯化钠水溶液洗脱，经1.2moL／L氯化钠溶液洗脱下来的为CS组分，经1.5moL/L氯化钠溶液洗脱下来的为KS组分，这种方法操作麻烦，成本高，对工业化中大量硫酸软骨素的纯化不适用。

发明内容

为解决目前从硫酸软骨素中去除硫酸角质素困难,难以工业化生产的问题，本发明提供了一种从硫酸软骨素粗提物中去除硫酸角质素的方法，具有去除效率好、得到的硫酸软骨素纯度高、操作简单、适于工业化生产的特点。

本发明为解决上述问题提出的技术方案：

一种从硫酸软骨素粗提物中去除硫酸角质素的方法，其特征在于采用以下步骤：

（1）称取硫酸软骨素粗提物，加去离子水配制质量分数10-15%的粗提物溶液，用氢氧化钠溶液调PH为12-14，室温搅拌2-3小时，然后用盐酸调PH为8-9，升温至45-50℃，保温3-4小时，降至室温继续用盐酸调PH为6-7，过滤得滤液；

（2）向滤液中加入氯化钠调节电导率为45-48ms/cm；

（3）向调节好电导率的溶液中加入酒精度为95-100%乙醇溶液，控制流速为10-15mL/（L·min），不断搅拌，至酒精度为50-55%，静置沉淀2-4小时，过滤得沉淀物；

（4）将沉淀物脱水后干燥得硫酸软骨素成品。

步骤（1）中所述的硫酸软骨素粗提物中硫酸软骨素含量为90-92%，硫酸角质素含量为2-4%，蛋白质含量为1-3%。步骤（1）中所述的加入氢氧化钠溶液浓度为2moL/L。

步骤（3）中所述的流速为13mL/（L·min）。

步骤（4）中所述的成品中硫酸软骨素含量为97-99%，得到的硫酸角质素的含量为0.02-0.06%，蛋白质含量为0.5-0.8%。