[发明专利]一种甜薯茎段离体快速繁殖的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养领域，涉及一种甜薯茎段离体快速繁殖的方法。

背景技术

甜薯（D. esculenta (Lout) brukill）为山药同属不同种食用植物，广泛分布于热带、南亚热带地区，如中国广东、广西、海南及非洲尼日利亚等。其食用部分为类似马铃薯状的球形块茎，肉质细嫩、食味佳、入口绵软，可做蔬菜、杂粮或药用等。

目前甜薯是品种丰富但无规模栽培的农家小种，我们近年来从海南农家引种，并通过耐寒性筛选获得了在江苏适生的品系，通过营养成分检测发现，其多糖含量为目前市场公认的多糖含量最高的铁棍山药的3~4倍；且与江苏主栽的直根类山药品种不同，甜薯为浅根类植物，种植无需挖深沟、筑高垄、套管等，收获也容易，因此，极大地降低了生产成本；甜薯一棵植株可生长30-40个球状块茎，亩产可达3000斤以上，产量大；同时，就其社会效益来看，甜薯抗旱耐肥、少病虫害且长势强，适合在江苏省缺水缺肥的低山丘陵地区种植，并且因其对光照要求不高，不仅可种植在已有的耕地上，还可以在次生林、经济林间的空地种植，不用与现有农作物抢占土地资源，从而缓解土地资源日益匮乏的矛盾。多糖含量高、浅根系易种好收、产量高、江苏适生等诸多优点，使得甜薯成为一个新兴的、开发潜力大、前景好的山药新种。

此外，传统的山药种植是在收获季节选健壮、无病虫害的块茎贮藏，次年种植季节取出切断种植，这种传统的“春种、秋收、冬藏”方式存在种块严重浪费、繁殖速度很慢、人力物力消耗大等问题；而且，由于长期的无性繁殖，导致病毒和病害的积累与传播，致使品质退化、产量下降。前人研究表明，通过组织培养脱除病毒的方法不仅可以极大提高山药繁殖系数，而且也会解决长期营养繁殖所造成的病毒病和品质退化等问题，在很多种或品种如铁棍山药、怀山药、叉蕊薯蓣等中已有很多报道。甜薯中尚未见组织培养获得脱毒苗的研究报道，本发明将以甜薯为研究对象，通过不同外植体、不同激素种类与浓度处理等多因素多水平的实验设计，筛选出了最佳实验条件，建立了甜薯组织培养的最佳快速繁殖体系，为甜薯的产业化生产提供了理论依据和实践指导。

发明内容

本发明提供了一种甜薯茎段离体快速繁殖的方法，通过组织培养技术，选择甜薯外植体，消毒灭菌后接种入不同的激素和浓度的培养基进行培养，并筛选出最佳快速获得脱毒苗的体系，解决甜薯长期无性繁殖品质退化、产量下降的问题。

为了达到上述目的，本发明采用的技术步骤如下：

（1）将所采健康甜薯的幼嫩茎段进行灭菌消毒；

（2）将步骤（1）中消毒后的茎段切成单节茎段；

（3）将步骤（2）中的单节茎段接入已经灭菌的MS培养基中进行诱导出芽；

（4）将步骤（3）中的芽苗转入1/2MS培养基进行继代培养；

（5）将步骤（4）中生长成的无根幼苗转入生根培养基进行生根培养。

其中步骤（1）中的幼嫩茎段可采甜薯生长三个月之后成熟植株顶端幼嫩茎段；

步骤（2）中单节茎段要切除接触升汞的伤口及叶片；

步骤（3）中的操作最好在超净工作台上完成，要保持在无菌条件下操作；

步骤（4）中要分株继代培养；

步骤（5）中幼苗的基部一定要插入培养基里生长。

本发明提供获得甜薯脱毒苗快速繁殖的最佳组培体系，以提高甜薯的品质和产量，具有较大的实际应用价值。

附图说明

图1是单节茎段刚开始接入培养基。

图2是茎段培养出了腋芽及叶片。

图3是继代培养的芽苗。

图4是将培养出的无根小苗接入生根培养基长出根的脱毒苗。

具体实施方式

下述实施例中所用方法如无特别说明，均为常规方法。MS培养基、蔗糖、琼脂、激素AD（腺嘌呤）KT（激动素）均由索莱宝公司生产，酒精由南京化学试剂有限公司生产，聚乙烯吡咯烷酮K-30（PVP）由国药集团化学试剂有限公司生产，激素NAA（a-萘乙酸）和IBA（3-吲哚丁酸）由上海楷洋生物技术有限公司生产，激素6-BA（6-苄氨基腺嘌呤）购自上海瑞永生物科技有限公司，实验中甜薯是在南京中山植物园内种植的。下面对其培养过程进行详细描述。

采样

自南京中山植物园园内引种的甜薯中取生长壮、无病虫危害植株枝蔓上部约3-5cm的嫩茎,用自来水冲洗干净,剪掉开展的叶片,用无菌水漂洗3～5min。

培养基的制备