[发明专利]一种重组猪源抗菌肽及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本项发明属于农业畜牧兽医应用领域，涉及的是一种重组猪源抗菌肽及其制备方 法和应用。

背景技术

随着抗生素在饲料生产以及动物养殖中的不断应用，许多问题接踵而至，如抗生 素添加剂的长期使用导致耐药性病原菌的产生，耐药菌株的出现不仅威胁到了畜牧业，更 成为了人类不得不面对的公共卫生危机。因此，人们迫切需要开发一种新型安全的抗菌物 质作为饲料添加剂替代抗生素添加到饲料中，从而达到预防动物疾病，促进动物生长，降低 饲养成本目的。重组肽PR39是重组表达的一种猪源抗菌肽，含有39个氨基酸残基。它不仅是 一种具有广谱抗菌活性的小分子多肽，与此同时还具有许多生物活性例如促进伤口愈合、 促进血管生成和降低炎症反应等作用。本研究利用基因工程方法在枯草芽胞杆菌中成功表 达了具有广谱抗菌活性的重组抗菌肽PR39，为基因工程方法规模化生产抗菌肽奠定了理论 与实践基础。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猪源抗菌肽及其制备方法和应用，是一种具有广谱抗 菌活性的重组肽。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种重组猪源抗菌肽PR39，其序列如序列 表SeqNo.1所示。

本发明还具有如下技术特征：

1、如上所述的一种重组猪源抗菌肽PR39的制备方法，如下：根据枯草芽孢杆菌的 分泌特点以及下游纯化技术特点，在猪源抗菌肽PR39基因上游融合信号肽AmyQ基因，六个 组氨酸基因，硫氧还蛋白基因以及肠激酶切位点基因，并在整条基因两端添加酶切位点 EcoRⅠ和BamHⅠ。

2、如上所述的一种重组猪源抗菌肽PR39，在治疗革兰氏阴性菌感染性疾病药物中 的应用。

本发明的重组肽PR39是一种重组表达的猪源抗菌肽，它是一种具有广谱抗菌活性 的小分子多肽，同时还具有许多生物活性例如促进伤口愈合、促进血管生成和降低炎症反 应等作用。其制备方法为基因工程方法规模化生产抗菌肽奠定了理论与实践基础，对建立 肽类基因工程菌和抗菌肽研究的共性技术具有重要意义。

附图说明

图1为目的基因片段酶切鉴定结果图，

其中，M：DNA分子量标准；1：空载体质粒；2：重组表达载体质粒；3：重组表达载体 EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切结果；4：空载体EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切结果。

图2为重组表达载体构建测序结果图。

图3为利用Tricine-SDS-PAGE对肠激酶切割融合蛋白的检测结果图，

其中，M：蛋白分子量Marker；1：未切割的融合蛋白；2：切割后的融合蛋白。

图4为利用Tricine-SDS-PAGE纯化后的PR39的检测结果图，

其中，M：蛋白分子量Marker；1和2均为利用阳离子交换柱纯化后的肽。

图5为重组抗菌肽PR39的溶血活性分析图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限 于此。

实施例1目的基因的设计与合成

根据枯草芽孢杆菌的分泌特点以及下游纯化技术特点，在猪源抗菌肽PR39基因上 游融合信号肽AmyQ基因、六个组氨酸基因、硫氧还蛋白基因以及肠激酶酶切位点基因。具体 基因如下所示：

GCGGAATTCatgatccaaaaacgtaaacgtacagtttctttccgtcttgttcttatgtgcacacttcttttcgtttctcttcctatcacaaaaacatctgctcgtcgtcgtcctcgtcctccttaccttcctcgtcctcgtcctcctcctttcttccctcctcgtcttcctcctcgtatccctcctggcttccctcctcgtttccctcctcgtttccctGGATCC

其中，下划线为限制性内切酶切位点，斜体为肠激酶酶切位点，虚线是组氨酸标 签，双下划线为硫氧还蛋白编码基因，加粗大写为终止密码子TAA。

上述整条融合基因AmyQ-6×His-Thioredoxin-Enterokinasesite-PR39由上海 生工生物技术有限公司合成。