[发明专利]棒束孢微菌核的培养方法及其应用

说明书

本发明公开了一种棒束孢微菌核的培养方法及其应用，发酵方法包括：1)制备棒束孢孢子接种体；2)微菌核诱导培养：将步骤1中制备的棒束孢孢子接种体加入诱导培养液中振荡培养6～8天；3)发酵液过滤，弃去上清液，得到微菌核沉淀，干燥，保存。还公开了棒束孢微菌核在防治粉虱类害虫中的应用以及一种防治粉虱类害虫的生防制剂。本发明方法生产的微菌核能够适应高温、干旱、强紫外等外界不良环境，具有抗逆耐储、货架期长和持续控害的特点；微菌核发酵周期短，生产成本低、工艺可控性强，所用原料易于获取。微菌核可以用作制备新型杀虫真菌制剂的活性成分。

技术领域

本发明属于生物制剂领域，具体涉及棒束孢微菌核的培养方法及其在防治害虫方面的应用。

背景技术

粉虱类刺吸式口器的害虫常群集于叶片、嫩茎、花蕾、顶芽等部位，刺吸汁液，使叶片皱缩、卷曲、畸形，严重时引起枝叶枯萎甚至整株死亡，危害于多种农作物、果木、蔬菜等。目前刺吸式口器害虫防控主要依靠化学防治，化学农药的大量施用导致害虫抗药性产生，并且污染生态环境、影响蔬菜农产品安全、威胁人民身体健康；还大量杀伤害虫天敌，破坏生态平衡。

棒束孢(Isaria)是一类能够寄生于多种害虫的虫生真菌，能穿透害虫体表进入体内，在害虫体内繁殖消耗寄主营养使害虫致死，能造成害虫局域内的流行性病发生；同时具有不污染环境、无残留、对人畜无害、害虫不会产生抗药性等优点，已经越来越广泛地应用到害虫的生物防治。由于液体发酵产生的芽生孢子有不耐储存，致病力低等缺陷，不适宜作为杀虫制剂的有效成分。目前利用棒束孢进行生物防治的有效成分为分生孢子，是通过液固两相发酵工艺进行生产的，但棒束孢产孢需要光照刺激，生产周期长、并且分生孢子抗逆能力差、货架期短，导致生产成本偏高，田间防效不稳，影响了棒束孢的产业化与实际应用。

寄生真菌主要类群为丝状真菌，通常产生菌丝体和分生孢子，少数种类也可产生厚垣孢子。真菌微菌核是丝状真菌度过高温、低温或干旱等不良环境的休眠繁殖体，是菌丝体互相纠结，菌丝变异分化产生的外层致密坚硬、有色素沉淀，内层髓质化的组织体，能够在一定的湿度和温度条件下，重新萌发进行产孢。目前已证实虫生真菌液体诱导产生的微菌核能够作为一种分生孢子的替代有效成分，应用于生物防治。目前寄生真菌的菌核或微菌核的诱导形成仅在白僵菌、绿僵菌和野村菌有报导，而棒束孢微菌核诱导形成未见报导。

发明内容

本发明的目的是针对上述问题，提供一种可规模化生产棒束孢微菌核的培养方法及其应用，开发生产成本低、侵染活力高、抗逆性强的棒束孢新侵染结构体，提供一种防治害虫的生防制剂，为杀虫真菌制剂的创制提供高质量的母药或原粉，解决目前没有有效的棒束孢微菌核的培养方法，和传统孢子菌剂抗逆能力差、货架期短，贮运不便的共性技术难题。

本发明的目的是这样实现的：

一种棒束孢微菌核的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)制备棒束孢孢子接种体；

2)微菌核诱导培养：将步骤1中制备的棒束孢孢子接种体加入诱导培养液中振荡培养6～8天；

所述诱导培养液中含有的原料及其含量如下：