[发明专利]基于表达HBsAg和HBcAg的热失活全重组汉逊酵母细胞的乙肝治疗疫苗

说明书

基于表达HBsAg和HBcAg的热失活全重组汉逊酵母细胞的乙肝治疗疫苗，以重组汉逊酵母胞内表达的HBsAgVLP和和HBcAgVLP为抗原，重组汉逊酵母表达的HBsAg的氨基酸序列中共含有19个CTL表位。重组汉逊酵母表达的HBcAg的氨基酸序列中共含有19个CTL表位，以热失活全重组汉逊酵母细胞为佐剂。热失活全重组汉逊酵母细胞为最主要专职抗原递呈细胞(DC)Dectin‑1受体的高效激动剂。HBV特异性CTL细胞，靶向感染HBV的肝细胞释放IFN‑γ：第一步非肝细胞损伤地减少其90％以上cccDNA分子池，第二步提高了过程中损伤受HBV感染的肝细胞，并触发HBV免疫逆转。

技术领域

本发明属基因工程领域,涉及疫苗为热失活全重组汉逊酵母细胞表达HBsAg和HBcAg治疗乙肝疫苗。

背景技术

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是一个严重的公共卫生问题。据世界卫生组织(World Health Oganization,WHO)报道,全球60亿人口中，约20亿人曾感染过HBV，其中3.5亿人为慢性HBV感染，每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌(肝癌)。全球肝癌患者中，75％以上是由HBV所致。我国属HBV感染地方性流行区。我国卫生部于1992年将乙型肝炎疫苗纳入计划免疫管理。2001年12月国务院正式批准将乙型肝炎疫苗纳入儿童计划免疫,要求各省市自治区从2002年起,除收取少量手续费外,给所有新生儿免费接种乙型肝炎疫苗。按照2005年3月制订的计划免疫条例,自2005年6月1日起,所有新生儿乙型肝炎疫苗免疫完全免费。经过近15年的努力,我国一般人群,尤其是15岁以下儿童,乙型肝炎病毒感染率明显下降。据2006年全国乙型肝炎血清流行病学调查表明,全人群乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带率己由1992年9.75％降至7.18％,5岁以下儿童的乙型肝炎表面抗原携带率已由原来9.67％降至0.96％。据此推算,我国现有的慢性HBV感染者约9300万人,其中慢性乙型肝炎患者约2000万例。每年因HBV导致的肝硬化和肝癌死亡30余万例,新发乙型肝炎病例50万-100万例。因此,本病是我国当前和今后相当长时期内危害人民健康、阻碍社会发展、影响社会稳定的重要因素,是一个严重的公共卫生问题,也是我国在建立以人为本的和谐社会过程中,需要优先解决的一个重大健康问题。我国人群HBV感染的流行率高,给国家带来了沉重的经济负担。据调查.我国每年因慢性乙肝(包括肝硬化、肝癌)的直接和间接医疗费用约6800亿元。乙肝疫苗免疫预防与治疗是降低疾病负担最有效的方法。

基因重组技术是现代生物技术的核心技术；也是规模化生产乙肝疫苗主要组份——病毒样颗粒乙肝表面抗原(HBsAg VLP)的唯一技术。本专利权人从1995年开始从事汉逊酵母重组乙肝疫苗研发工作。1998-2002年在大连高新生物制药有限公司，主持开发的汉逊酵母重组HBsAg adw2乙肝疫苗，HBsAg VLP抗原纯品(原液)产率为40mg/升；于2002年起经国家审批上市。2003-2006年本人为北京天坛生物制品股份有限公司协议开发的重组汉逊酵母HBsAg-adr2乙型肝炎疫苗。其HBsAg VLP抗原纯品(原液)产率为85mg/升以上；已于2015年申报国家新药审评，以该疫苗为基础申请的中国专利公开号为CN104232661A。

根据现有技术查明的乙型肝炎发病机制如下：人感染HBV后,一般可分为免疫耐受期、免疫清除期和非活动或低(非)复制期。免疫耐受期的特点是HBV复制活跃,血清HBsAg和HBeAg阳性,HBV DNA滴度较高(＞10⁵拷贝/ml),血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平正常,肝组织学无明显异常。免疫清除期表现为血清HBV DNA滴度＞10⁵拷贝/ml,但一般低于免疫耐受期,天门冬氨酸氨基转移酶(AST)持续或间歇升高,肝组织学有坏死炎症等表现。非活动或低(非)复制期表现为HBeAg阴性,抗-HBe阳性,HBV DNA检测不到(PCR)法或低于检测下限,水平正常,肝组织学无明显炎症。但在青少年和成人期感染HBV,一般无免疫耐受期,一开始即为免疫清除期,表现为急性乙型肝炎,其中仅5％-10％发展成慢性。但其确切的发病机制仍不了解。