[发明专利]一种酶法制备谷胱甘肽的工艺方法

权利要求书

1.一种酶法制备谷胱甘肽的工艺方法，其特征在于包括以下步骤：

1）向反应釜中加入L-谷氨酸钠（L-Glu.Na)，L-半胱氨酸(L-Cys)，甘氨酸(Gly)，三磷酸 腺苷二钠（ATP.Na2），六水氯化镁（MgCl2.6H2O），六偏磷酸钠[(NaPO3)6]，二硫苏糖醇 （DTT）和纯化水搅拌溶解；

2）采用抽真空氮气置换的方法置换反应体系中的空气，置换完毕氮气保护整个反应体 系；

在25-45℃、氮气保护下，用碱性溶液调节pH值至6.0-8.0；

3）加入反应液1%-3%的谷胱甘肽酶液，氮气保护下、25-45℃搅拌反应2-4h，反应过程中 用碱性溶液控制反应体系pH值在6.0-8.0；

4）反应完毕，放料，料液离心除去不溶物，收集滤液；

5）将得到的滤液通过超滤机进行超滤，收集超滤透析液；

6）将超滤透析液调酸后上DA201-C型大孔吸附树脂柱；该大孔树脂柱的径高比为0.05- 0.2，上样pH值为2.0-3.5；

7）用1-3bv的纯化水冲洗大孔树脂柱；

8）用50%-95%的乙醇洗脱解吸附大孔树脂柱，收集茚三酮显色部分洗脱液；

9）将收集的洗脱液30-50℃减压浓缩，真空度≤-0.09MPa，浓缩至GSH含量为15%-30%；

10）往浓缩液中加入0.5-1.5倍量的有机溶剂，氮气保护下、0-25℃（优选10-15℃）搅拌 析晶10-24h（优选18-20h）；

11）析晶完毕，放料离心，乙醇洗涤，30-50℃减压至真空度≤-0.09MPa，干燥6-8h，得谷 胱甘肽粗品。

2.根据权利要求1所述的酶法制备谷胱甘肽的工艺方法，其特征在于：所述步骤1）中L- Glu.Na的投料量为9-16g/L，L-Cys的投料量为6-11g/L，Gly的投料量为4-8g/L，ATP.Na2 的投料量为0.6-1.2g/L，MgCl2.6H2O投料量为14-24g/L，(NaPO3)6投料量为21-40g/L， DTT投料量为0.1-1.5g/L。

3.根据权利要求1所述的酶法制备谷胱甘肽的工艺方法，其特征在于：上述步骤中的碱 性溶液为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾、氨水中的一种。

4.根据权利要求1所述的酶法制备谷胱甘肽的工艺方法，其特征在于：所述步骤11）中 的有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇或丙酮中的一种。

5.根据权利要求1所述的酶法制备谷胱甘肽的工艺方法，其特征在于：所述置换反应体 系中的空气的次数为三次。