[发明专利]一种包含喜树碱的层层自组装纳米靶向载体的制备方法

权利要求书

1.一种包含喜树碱的层层自组装纳米靶向载体的制备方法，其特征在于所述方法步骤如下：

a、还原敏感性壳聚糖衍生物制备：（1）以ε-己内酯为单体，苯甲醇为引发剂，加入Sn（Oct）₂，控制ε-己内酯、苯甲醇以及Sn（Oct）₂的质量比为50：5～10：0.5～1，在N₂环境中80～120℃条件下不断搅拌，持续反应12～48 h，获得PCL-OH；（2）将0.8～1.6 g PCL-OH 加入到10 mL 二氯甲烷溶液中，另将0.8～1.6 g 对硝基苯基氯甲酸酯溶于10 mL 二氯甲烷，将两溶液混合，室温下反应12～48小时生成PCL-NPC；（3）将0.5～1 g胱氨和1～4 mL三乙胺溶于20 mL甲醇中，10～30 min之后，将10 mL Boc₂O甲醇溶液缓慢滴加到上述溶液中，N₂环境室温条件下反应6～12小时生成Cys-Boc-Mono；（4）将0.4～0.8 g PCL-NPC、0.2～0.4 g Cys-Boc-Mono和0.4～0.8 mL三乙胺溶于二氯甲烷中，N₂环境室温条件下反应12～48小时生成PCL-Cys-Boc-Mono，去保护后生成PCL-Cys-NH₂；（5）将0.4～0.8 g PCL-Cys-NH₂和0.4～0.8g 壳聚糖分散到30～50 ml 四氢呋喃中，N₂环境室温条件下反应12～24小时后加入0.1～0.5甘草次酸、0.1～0.5 g EDC·HCl 和0.1～0.5 g NHS，N₂环境室温条件下，继续反应12～24小时，反应结束后，用乙醇清洗数遍，离心获得还原环境敏感的PCL-SS-壳聚糖-甘草次酸聚合物；

b、载喜树碱磷酸钙纳米颗粒制备：（1）取10 mg 喜树碱和20～40 mg的氯化钙溶于1 mL蒸馏水中混合均匀；（2）取80～120 mg的磷酸氢二钠溶于1 mL蒸馏水中混合均匀；（3）取环己烷、己醇、Trion-X100于烧杯中充分搅拌，其体积比为3：1～3：3～5；（4）分别取10 mL（3）中的混合液放入小烧杯中标记为A和B，在A中加入80～120 μL上述氯化钙和喜树碱混合液，在B中加入80～120 μL上述磷酸氢二钠溶液；将B溶液缓慢滴加到A中，反应2～4 h，加入10～20 mL乙醇破乳，用蒸馏水清洗；

c、组装一层样品制备：取0.1 g PCL-SS-壳聚糖-甘草次酸聚合物溶于10～20 mL 醋酸缓冲液，不断搅拌，滴加1～2 mL 载喜树碱磷酸钙纳米颗粒分散液，持续搅拌20～40 min，用醋酸缓冲液洗涤，离心获得组装一层样品；

d、组装两层样品制备：取2 g ι-卡拉胶加入到含有10～20 mL 醋酸溶液的三口瓶中，在60～80℃下搅拌至ι-卡拉胶完全溶解；不断搅拌，滴加1～2 mL组装一层样品分散液，持续搅拌20～40 min，用醋酸缓冲液洗涤，离心获得组装两层样品；

e、利用c或d方法交替组装壳聚糖衍生物与ι-卡拉胶，得到多层纳米靶向载体。

2.根据权利要求1所述的包含喜树碱的层层自组装纳米靶向载体的制备方法，其特征在于所述步骤a中，10 mL Boc₂O醇溶液中含有0.4～0.8 g Boc₂O。

3.根据权利要求1所述的包含喜树碱的层层自组装纳米靶向载体的制备方法，其特征在于所述步骤c中，载喜树碱磷酸钙纳米颗粒分散液的浓度为0.1 g/mL。

4.根据权利要求1所述的包含喜树碱的层层自组装纳米靶向载体的制备方法，其特征在于所述步骤c中，醋酸缓冲液的浓度为0.2%v/v，pH为6.0。

5.根据权利要求1所述的包含喜树碱的层层自组装纳米靶向载体的制备方法，其特征在于所述步骤d中，醋酸溶液的浓度为0.5～3%v/v。

6.根据权利要求1所述的包含喜树碱的层层自组装纳米靶向载体的制备方法，其特征在于所述步骤d中，组装一层样品分散液的浓度为0.1 g/mL。