[发明专利]一株瑞氏木霉工程菌CstrxR1及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一株瑞氏木霉工程菌CstrxR1及其构建方法和应用。瑞氏木霉工程菌CstrxR1，分类名称为瑞氏木霉Trichoderma reesei CstrxR1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为：2016年3月1日，保藏编号为CCTCC NO:M2016078，保藏地址为中国湖北武汉武汉大学。本发明的瑞氏木霉工程菌CstrxR1，其各纤维素酶产量与瑞氏木霉亲本菌株相比提高0.78倍。本发明对提高纤维素酶生产效率具有重要应用价值。

技术领域

本发明属于工程菌技术领域，具体涉及一株瑞氏木霉工程菌CstrxR1及其应用。

背景技术

纤维素酶是能将纤维素降解为葡萄糖单体的一组酶系的总称，通常包括内切型葡聚糖酶、外切型葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶。纤维素酶资源对于可持续利用生物质资源具有重要意义，可广泛应用于生物能源、饲料、洗涤、造纸及植物源活性物质制备等领域。瑞氏木霉（Trichoderma reesei）能够产生完整的纤维素酶系，是工业生产纤维素酶的重要菌株。当前，传统的诱变育种技术难以继续提升瑞氏木霉产纤维素酶的能力。借助基因工程手段改良瑞氏木霉的纤维素酶产生能力，成为降低纤维素酶生产成本的有效途径。

丝状真菌的细胞氧化还原状态能够控制许多重要基因的表达调控。硫氧还蛋白系统（thioredoxin system）是存在于绝大多数生物体中的一类抗氧化系统，具有调控细胞氧化还原平衡等多种重要功能。硫氧还蛋白从氧化态转化成还原态依赖于硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase，TrxR） 的催化作用。因而，TrxR对于胞内的氧化还原平衡或某些蛋白分子的氧化还原状态具有重要的调控作用。瑞氏木霉细胞中具有高水平的 TrxR会极大的改变其细胞氧化还原状态，进而增强相关蛋白（如纤维素酶）分子的基因表达。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一株瑞氏木霉工程菌CstrxR1，能高产纤维素酶。本发明的另一目的是提供上述瑞氏木霉工程菌CstrxR1的构建方法。

技术方案，为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一株瑞氏木霉工程菌CstrxR1，分类名称为瑞氏木霉Trichoderma reesei CstrxR1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为：2016年3月1日，保藏编号为CCTCCNO：M2016078，保藏地址为：中国湖北武汉武汉大学。

在所述的瑞氏木霉工程菌CstrxR1中克隆有来自于虫拟蜡菌的硫氧还蛋白还原酶基因序列，该基因序列如SEQ ID NO.1所示。

构建所述瑞氏木霉工程菌CstrxR1的方法：将序列如SEQ ID NO.1所示的DNA片段通过质粒pAg1-CstrxR1导入瑞氏木霉基因组，所述质粒pAg1-CstrxR1是在质粒pAg1-H3的KpnI和ApaI位点顺序装入瑞氏木霉纤维二糖水解酶I启动子序列Pcbh1、序列如SEQ IDNO.1所示的DNA片段和瑞氏木霉纤维二糖水解酶I 终止序列Tcbh1。

所述瑞氏木霉为瑞氏木霉D-86271。

所述的瑞氏木霉工程菌CstrxR1在产纤维素酶中的应用。

有益效果：与现有技术相比，本发明成功构建出瑞氏木霉工程菌CstrxR1，通过实验证明高表达虫拟蜡菌中硫氧还蛋白还原酶编码基因的瑞氏木霉工程菌，其纤维素酶产量（滤纸酶活）与亲本瑞氏木霉相比提高0.78倍。本发明对工业生产中提高纤维素酶生产效率具有重要的应用价值。

附图说明

图1是表达质粒pAg1-CstrxR1的图；