[发明专利]一株里氏木霉及其培养方法与应用

权利要求书

1.一株里氏木霉(Trichoderma reesei)T1，于2015年12月30日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址武汉市武昌珞珈山，菌种保藏编号CCTCC NO:M2015804。

2.如权利要求1所述的里氏木霉(Trichoderma reesei)T1的培养方法，其特征在于，步骤如下：

(1)将里氏木霉(Trichoderma reesei)T1接种于平板培养基中，在28～32℃下活化培养68～76h，制得活化菌株；

(2)将步骤(1)制得的活化菌株接种于液体培养基中，在28～32℃，150～250rpm摇床培养条件下培养68～76h，制得液体种子；

(3)将步骤(2)制得的液体种子按1:(4～6)的体积比接种于液体培养基中，在28～32℃，150～250rpm摇床培养条件下培养68～76h，制得里氏木霉(Trichoderma reesei)T1菌液。

3.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中的平板培养基为麸皮平板培养基，制备方法如下：

每10g麸皮加入500mL蒸馏水中，煮沸30min，经8层纱布过滤后，向滤液中加入质量百分比为2％的琼脂粉，121℃高压蒸汽灭菌30min。

4.如权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述步骤(2)和(3)中，每升液体培养基组分如下：

15～25g麸皮、15～25g微晶纤维素、8～12g(NH₃)₂SO₄、12～18g KH₂PO₄、0.4～0.8gMgSO₄、0.6～1.0g CaCl₂、0.004～0.006g FeSO₄·7H₂O、0.0015～0.0017g MnSO₄·H₂O、0.0013～0.0015g ZnSO₄·7H₂O。

5.权利要求1所述里氏木霉(Trichoderma reesei)T1在生产纤维素酶复合体中的应用，其特征在于，步骤如下：

(i)将里氏木霉(Trichoderma reesei)T1菌液接种于发酵培养基中，在28～32℃，150～250rpm摇床培养条件下培养68～76h，制得发酵液；

(ii)将步骤(i)制得的发酵液经固液分离，取上清液，然后旋转蒸发浓缩体积至10％，二次固液分离，取上清液，经超滤管浓缩体积至1％，制得纤维素酶复合体。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述步骤(i)中，每升发酵培养基组分如下：

15～25g麸皮、15～25g微晶纤维素、8～12g(NH₃)₂SO₄、12～18g KH₂PO₄、0.4～0.8gMgSO₄、0.6～1.0g CaCl₂、0.004～0.006g FeSO₄·7H₂O、0.0015～0.0017g MnSO₄·H₂O、0.0013～0.0015g ZnSO₄·7H₂O。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述步骤(ii)中，固液分离为8000～10000rpm离心10～15min。

8.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述步骤(ii)中，二次固液分离为35000～40000rpm离心25～35min。

9.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述步骤(ii)中，超滤管浓缩为3kDa的超滤管浓缩550～650min。

10.权利要求5所述纤维素酶复合体在降解纤维素中的应用，其特征在于，步骤如下：

配制浓度为1～200g/L的纤维素溶液，然后按照每克纤维素添加0.1～100mg蛋白的比例加入纤维素酶复合体发酵液，在温度30℃～60℃、pH3.5～7.0的条件下反应4～120小时，得降解产物。