[发明专利]一种鸭坦布苏病毒病疫苗的效力检验方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种兽用疫苗的效力检验方法，尤其涉及一种鸭坦布苏病毒病疫苗效力的检验方法，属兽用生物制品检验技术领域。

背景技术

鸭坦布苏病毒病为2010年发生的一种新发或突发传染病，其病原为鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu Virus,DTMUV)，在病毒分类上属于黄病毒科的成员。主要临床特征为产蛋鸭产蛋量突然下降和鸭死淘率显著增加，自然感染和人工感染病例的主要大体病变为卵泡变形、出血、液化及脾脏体积变化(感染早期脾脏肿大，后期脾脏缩小)和颜色变黑。主要的组织学病变：脾脏白髓体积缩小，淋巴细胞坏死、流失和网状细胞活化增生。脑组织出现嗜神经原、管套和胶质细胞增生等病毒性脑炎病变。疫情流行初期，根据主要的病理变化，将该病暂命名为鸭出血性卵巢炎。随后经过病毒分离鉴定和DNA序列同源性分析结果表明，引起上述鸭疫情的病毒为一种虫媒黄病毒、Ntaya病毒群中的Tembusu病毒(Cao et al.,2011；Su et al.,2011；Yan et al.,2011)。2011年中国畜牧兽医学会首届水禽疫病防控研讨会将该病名称统一为“鸭坦布苏病毒病”。Tembusu病毒首次于1968-1970年在Sarawak地区的蚊子体内分离到，曾一度认为家禽可能是病毒的自然宿主(Platt et al.,1975)。Tembusu病毒分别于1982和1992年在泰国北部地区蚊子体内分离到(Leake et al.,1986；Pandey et al.,1999)。2000年，研究人员报道了一种新的名为Sitiawan的黄病毒感染鸡后能够引起鸡生长发育受阻(Kono et al.,2000)，Sitiawan病毒与Tembusu病毒核酸的同源性为92％。中国从鸭体内分离到的Tembusu病毒与Bagaza病毒的核酸高度同源(Tang et al.,2012；Yun et al.,2012)。

疫苗是预防传染病最有效和经济的手段之一。在鸭坦布苏病毒病疫苗的研究方面，北京市农林科学院和瑞普(保定)生物药业有限公司、中国农业科学院上海兽医研究所、齐鲁动物保健品有限公司、福建省农业科学院畜牧兽医研究所和重庆市农科院畜牧兽医研究所等分别报道了利用该病暴发期间所分离的毒株制备疫苗的方法。效力检验是疫苗质量检定的重要部分，效力检验方法和标准是疫苗质量控制的基础。在疫苗的效力检验方法中，免疫攻毒法存在成本昂贵、方法较繁杂和没有动物饲养条件的单位困难更大等缺点。

检测抗体的血清学方法由于不需要对免疫动物进行攻毒，避免了病毒扩散的潜在风险，克服了需要生物安全相应级别的实验室和攻毒动物舍的不便，符合实验动物福利3R(替代、减少和优化)原则，是疫苗效力评价经常使用的方法。抗体检测方法中，常用中和试验(Serum Neutralization Test,SNT)、血凝抑制试验(Hemagglutination-Inhibition,HI)和酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)。鸭坦布苏病毒感染或疫苗免疫鸭后，HI和ELISA抗体效价均明显高于中和抗体效价，测定中和抗体效价的中和试验不是首选。HI试验和ELISA法具有敏感和简便的优点，相比ELISA法，HI试验在定性的同时，也可以定量。

申请人前期申请了3种效力检验方法，均已授权，专利号分别为：ZL 201210203611.7、ZL 201210202292.8、ZL 201210202429.X，本方法是上述授权专利研究工作基础上的进一步发明，而且采用已经授权的专利技术验证了本方法可用于疫苗效力检验。申请的HI抗体效价测定法相对简单、对试验设施要求低、不存在散毒和易推广的优点。在鸭坦布苏病毒病疫苗的血清学效力检验方法中，目前还未见利用HI抗体效价测定法作为疫苗效力评价方法的报道。

发明内容

本发明目的是提供一种鸭坦布苏病毒病疫苗的效力检验方法，用于鸭坦布苏病毒病疫苗的实验室和临床效力评价。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明一方面，提供一种鸭坦布苏病毒病灭活疫苗效力检验方法，该方法使用HI抗体阴性鸭分为免疫组和对照组，免疫组各皮下或肌肉注射鸭坦布苏病毒病灭活疫苗，首免后2周进行二免，两次免疫的剂量均为0.5ml/只～1.0ml/只，接种后3～4周，每只鸭分别采血，分离血清，使用HI抗原进行HI抗体效价测定。对照组鸭HI抗体效价均应<1:5，免疫组应至少有70％鸭的血清HI抗体效价≥1:10，判灭活疫苗效力检验合格。