[发明专利]胃癌唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法

说明书

本发明公开了一种胃癌唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法，包括以下步骤：样品收集；纳米磁珠预处理；样品预处理；唾液样品洗脱上样；质谱分析；数据采集；数据分析；建立诊断模型。本发明将WCX结合MALDI‑TOF‑MS蛋白质学技术在方法学上具有高通量、高敏感性、高特异性优势；分析胃癌与慢性胃炎患者唾液在蛋白质组水平上的差异，发现了23个具有显著性意义的差异蛋白质峰，建立了由4267.09、6564.85、2138.14m/z三个显著差异蛋白峰组成的鉴别诊断模型，经临床回代检验该模型的灵敏度和特异度分别达96％和86％；显示该模型对胃癌和慢性胃炎的鉴别具有较高的诊断效率。

技术领域

本发明属于蛋白质谱应用技术领域，具体地说，涉及一种胃癌唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法。

背景技术

众所周知，胃炎和胃癌的初期临床表现难以鉴别，因此胃癌早期与慢性胃炎的鉴别诊断尤为重要。胃癌诊断的金标准是内镜加活检，但该检查属于侵入性检查，检查时患者普遍痛苦体验强烈，况且大量胃癌患者早期无明显症状，主动就医性差，难以作为胃癌普遍筛查手段；血清胃泌素(PG)水平的检查在胃癌诊断中具有重要作用，但其在人体内的水平受种族和地域的影响较大；B超多用于观察胃的邻近脏器，CT在组织特异性性方面存在不足，对胃粘膜的充血、水肿、浅表隆起或凹陷性病变不敏感。因此，目前仍缺乏能够用于大众人群的胃癌早期筛查方法。

胃癌早期诊断是提高胃癌患者5年生存率的关键。胃癌的发生发展常通过原癌通路，包括HP感染型胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠化生、原位癌等。慢性萎缩性胃炎和胃癌组织基因的表达既有相似性,又有异质性，肿瘤基因表达与癌前状态和癌前病变相关，基因表达的相似性提示慢性萎缩性胃炎与胃癌这两者病理发展的相关性和延续性。HP感染是慢性胃炎和胃癌的共同致病因素,而EBV病毒与HP联合感染，是肠型胃癌的重要危险因素。在慢性萎缩性胃炎患者体内检测到jhp0945，是发展为胃癌的重要分子标志物。胃癌PGⅠ和PGⅠ/Ⅱ水平明显低于萎缩性胃炎组以及慢性胃炎组。Ji W等通过检测p53β和Δ133p53两个亚型mRNA分别在慢性浅表性胃炎组织细胞、慢性萎缩性胃炎组织细胞、胃癌组织细胞的表达水平，结果发现慢性浅表性胃炎组织细胞中仅有p53βmRNA表达，慢性萎缩性胃炎组织细胞中同时有p53β和Δ133p53mRNA的表达，胃癌细胞系中没有p53β和Δ133p53mRNA的表达。分别采集25名慢性萎缩性胃炎患者、胃癌患者，以及正常健康人的血清标本，进行蛋白质组学分析，构建并验证胃癌前病变及胃癌的诊断模型，结果其敏感性和特异性均大于65％，高于现有的肿瘤标志物筛查水平。

寻找胃癌的生物标志物是目前研究胃癌早期诊断、分期、治疗靶点、以及预后评估的热点。蛋白质组学技术的发展为唾液生物标志物的发现提供了强大武器。也已发现唾液中含有2300多种蛋白质，利用唾液进行疾病诊断具有无创、微量、易于收集和储存、操作简便快捷、易于被患者接受等明显优势。已有研究证明，唾液中含有HP及HP抗体IgG、KYNA(具有抗结胃癌作用)等180余种生物标志物。唾液蛋白的研究目前多采用的方法，质谱技术是蛋白质组学研究中的前沿技术。

因此，提供一种诊断模型简便、快速、标本用量少，灵敏度高，特异性好的胃癌唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型的建立方法，就成为该技术领域急需解决的技术难题。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决现有技术对胃癌的检测复杂，检测周期长，灵敏度低，特异性差的问题，提供了一种胃癌唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种胃癌唾液蛋白指纹图谱分子诊断模型建立方法，包括以下步骤：

(1)样品收集，分别收集胃癌组和慢性胃炎组的唾液样品；

(2)纳米磁珠预处理；