[发明专利]一种抑制植物病毒传播的制剂及其应用

说明书

本发明提供了一种抑制植物病毒传播的制剂，所述制剂的活性成分包括使编码桃蚜表皮蛋白的基因MPCP4沉默的试剂。本发明的另一个方面还提供了使编码桃蚜表皮蛋白的基因MPCP4沉默的制剂在抑制植物病毒传播中的应用。本发明所提供的制剂，可抑制桃蚜在带毒植物上利用刺吸式吸口器获得植物病毒的能力，可以减少蚜虫在取食后对植物病毒的摄入量，减少桃蚜对植物病毒的携带。从而通过减少媒介昆虫获毒来防治植物病毒病，为防治病毒病提供了有效手段。

技术领域

本发明属于农业生物技术领域，具体涉及一种抑制植物病毒传播的制剂及其应用。

背景技术

桃蚜(Myzus persicae)是一种几乎遍布全球的多食性害虫，其不仅可以为害十字花科蔬菜、蔷薇果树、茄科作物等，还可为害烟草、菠菜及某些中草药等植物。另外，桃蚜作为媒介昆虫，可以传播115种植物病毒。媒介昆虫带毒是植物病毒病的主要传播途径。一旦媒介昆虫获得病毒，利用其迁移和迁飞的特性，会将其携带的病毒进行广泛传播，最终导致植物病毒病的大面积发生，给丰产丰收带来了严峻的挑战。因此，防治媒介昆虫或降低媒介昆虫的获毒量成为了防治植物病毒病的关键。目前，生产中防治媒介昆虫主要依赖于化学药剂，这使得部分药剂在一些地区的昆虫防治过程中已经出现极高水平的抗药性，故通过降低媒介昆虫获毒量来有效减少植物病毒病的发生已经迫在眉睫，而了解并掌握媒介昆虫的传毒机制则是前提。

桃蚜表皮蛋白是一类蛋白质的总称。Dombrovsky等人先后分离出了表皮蛋白MpCuP(编码的基因Mpcp1)、MpCuP1(编码的基因Mpcp4)、MpCuP2(编码的基因Mpcp2、Mpcp5)、MpCuP3(编码的基因Mpcp3)。对于以上分离出的表皮蛋白已有研究证实：基因Mpcp2、Mpcp5编码的蛋白MpCuP2与南瓜黄化花叶病毒(zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)的Hc-pro是互作的(Dombrovsky A,Gollop N,Chen S,2007)。而目前尚未有关于桃蚜表皮蛋白参与植物病毒传播的相关报道。因此，有必要对参与桃蚜获毒过程的蛋白因子进行深入研究，了解媒介昆虫的传毒机制，从而为植物病毒病的防控提供理论基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种能够通过影响虫体获毒过程进而抑制植物病毒传播的制剂。

为达到以上目的，发明人对桃蚜参与植物病毒传播的机制进行了深入的研究，意外的发现桃蚜表皮蛋白MpCuP1(编码基因Mpcp4)能够影响虫体对植物病毒的获取能力，参与了植物病毒经由桃蚜刺吸式吸口器传播的过程。基于以上研究成果，本发明提供了一种抑制植物病毒传播的制剂，所述制剂的活性成分包括使编码桃蚜表皮蛋白的基因MPCP4沉默的试剂。

其中，所述编码桃蚜表皮蛋白的基因MPCP4的序列如SEQ ID No.1所示。

所述病毒为经昆虫刺吸式吸口器传播的植物病毒，优选为黄瓜花叶病毒。

优选的，所述使编码桃蚜表皮蛋白的基因MPCP4沉默的试剂为编码桃蚜表皮蛋白的基因MPCP4的dsRNA干扰片段。所述dsRNA干扰片段优选是由如SEQ ID No.2所示的核苷酸片段所编码的。

本发明中，所述dsRNA干扰片段可以通过以下方式制备获得：以基因MPCP4的cDNA模板设计引物进行PCR扩增，获得PCR产物并纯化，以PCR产物为模板利用RNAi试剂盒进行dsRNA的制备，例如可以利用RNAi试剂盒(Ambion，USA)进行dsRNA的制备。

本发明所述的制剂可以为口服剂或注射剂，所述制剂还可以包括助剂和/或载体。

当所述制剂为口服剂时，可以包括口服剂可接受的助剂和/或载体，使得所述制剂可以通过饲喂的方式使用。

在本发明的一种实施方式中，所述制剂是将dsRNA干扰片段与适合被蚜虫取食的饲料混合制成的。