[发明专利]一种能够及时观察小麦黑胚病症状的接种鉴定方法

说明书

本发明公开了一种能够及时观察小麦黑胚病症状的接种鉴定方法。首先在小麦抽穗后，对小麦穗部进行剪壳处理以及对去壳后的小麦穗部进行杂菌隔离；将小麦黑胚病致病菌接种于含有PDA培养基的培养皿中进行暗培养，得到培养后的致病菌菌落；冲洗得到的致病菌菌落，经过滤、离心、调整孢子浓度后得到孢子悬浮液备用；在小麦籽粒满仁时，将孢子悬浮液喷洒在剪壳处理的穗子上，并用塑料袋将穗子罩上保湿；接菌后观察接种处理籽粒上病菌的侵染情况以及籽粒黑胚病症状的形成；小麦成熟时统计黑胚率，作为小麦黑胚病鉴定的结果。本发明方法不仅可以及时观察症状的产生情况，而且使鉴定结果更稳定可靠；并且根据浸染情况可以及时对小麦作出合理防治。

技术领域

本发明属于农作物病害检测技术领域，具体涉及一种能够及时观察小麦黑胚病症状的接种鉴定方法。

背景技术

小麦黑胚病是指小麦籽粒表面有不同形状和程度的黑色、褐色等症状，该病不仅降低小麦籽粒的外观品质，使小麦在市场上的出售级别降低而影响农民收入，而且降低种子发芽率，影响面粉品质，给小麦生产带来严重的危害。

小麦黑胚病病因复杂，受致病菌、环境因素及品种特性的影响，其严重程度随品种、地点、年份及防治措施等因素的不同而变化，各国报道的发病率一般在0.3～66.7%之间变化（参见：1、Li Q Y, Qin Z, Jiang Y M, Shen C C, Duan Z B, and Niu J S.Screening wheat genotypes for resistance to black point and the effects ofdiseased kernels on seed germination. J Plant Dis Protect, 2014, 121 (2): 79-88； 2、Fernandez, M. R., Sissons, M., Conner, R. L., Wang, H., amd Clarke, J.M. 2011. Influence of biotic and abiotic factors on dark discoloration ofdurum wheat kernels. Crop Sci. 51:1205-1214；3、代君丽，于巧丽，袁虹霞，邢小萍，张猛，孙炳剑，李洪连. 河南省小麦黑胚病菌的分离鉴定及致病性测定. 植物病理学报,2011, 41(3), 225-231.）。

小麦黑胚病是籽粒病害，在籽粒灌浆期发生发展，因为籽粒外有颖壳包被，不能及时观察黑胚病的症状形成情况，如果去掉颖壳又会对籽粒生长造成严重伤害甚至造成籽粒脱落，这给小麦黑胚病抗病机理研究、菌与寄主互作、病害防治等研究工作带来了一定的困难。目前，针对小麦黑胚病接菌鉴定方法的报告，都是在小麦穗部直接喷洒接菌，进行或者不进行保湿处理，成熟后统计发病率（参见：3、代君丽，于巧丽，袁虹霞等. 植物病理学报,2011, 41(3), 225-231；4、康业斌，刘顺通，成玉梅，段爱菊. 小麦对黑胚病的抗性及黑胚对产量损失的影响，植物保护，1999，3:25-27）。因为颖壳的阻隔，这些鉴定方法都无法及时的直接观察接菌后籽粒症状形成情况，而且由于没有直接将菌接在籽粒上，降低了致病菌的侵染效果，从而影响实验的准确性。因此，非常有必要探索一种小麦黑胚病接菌鉴定的方法，使致病菌直接侵染小麦籽粒、提高侵染效果确保实验结果稳定真实可靠，又能直接观察黑胚病的症状形成情况。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：针对直接喷洒接菌方法不能及时观察症状产生，以及菌与籽粒由于颖壳阻隔导致鉴定结果准确性降低的不足，本发明提供一种能够及时观察小麦黑胚病症状的接种鉴定方法。本发明首先在小麦抽穗后、籽粒未发育前将颖壳剪掉一部分，待籽粒满仁后再喷洒接菌套袋保湿鉴定，不仅使喷洒的致病菌孢子可以直接与籽粒接触，而且可以及时观察籽粒上黑胚病症状发生的情况，同时根据该浸染情况可以及时对小麦作出合理的防治措施。由此，本发明首次提供了一种剪壳接菌鉴定小麦黑胚病的方法，不仅可以及时观察症状的产生情况，而且使鉴定结果更稳定可靠；并且根据浸染情况可以及时对小麦作出合理防治。

为了解决上述问题，本发明采取的技术方案为：