[发明专利]一种泛一、二甲基化抗体及其制备方法

权利要求书

1.一种泛一、二甲基化抗体的制备方法，其特征在于具体步骤为：

（1）直接用多肽偶联载体蛋白：牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或牛甲状腺球蛋白，作为免疫抗原前提底物，用烷基化试剂(2-氯乙基)-甲基氯化铵和(2-氯乙基)-二甲基氯化铵通过化学修饰把载体蛋白中的半胱氨酸进行烷基化修饰分别模拟成一甲基化修饰赖氨酸和二甲基化修饰赖氨酸，分别记为Kc[me1]和Kc[me2]；

（2）再以这个富含模拟的一甲基化修饰赖氨酸的载体蛋白Kc[me1]和二甲基化修饰赖氨酸的载体蛋白Kc[me2]混合物作为免疫抗原，免疫兔子，得到特异识别一二甲基化蛋白抗体。

2.根据权利要求1所述的泛一、二甲基化抗体的制备方法，其特征在于具体操作流程如下：

（一）制备把半胱氨酸模拟成一甲基化修饰赖氨酸的载体蛋白

（1）取10-50mg载体蛋白溶解到烷基化试剂中，该试剂主要成分为4-羟乙基哌嗪乙磺酸、盐酸胍、L-甲硫氨酸；

（2）加入1-10mg二硫苏糖醇，进行反应；

（3）加入与载体蛋白等量的(2-氯乙基)-甲基氯化铵，进行烷基化反应；

（4）加入1-10mg二硫苏糖醇，继续反应；

（5）加入20-200ul巯基乙醇终止反应，得到模拟一甲基化修饰的载体蛋白，记为Kc[me1]；

（二）制备把半胱氨酸模拟成二甲基化修饰赖氨酸的载体蛋白

（1）取10-50mg载体蛋白溶解到烷基化试剂中，该试剂主要成分为4-羟乙基哌嗪乙磺酸、盐酸胍和L-甲硫氨酸；

（2）加入1-10mg二硫苏糖醇，进行反应；

（3）加入与载体蛋白等量的 (2-氯乙基)-二甲基氯化铵，进行烷基化反应；

（4）加入1-10mg二硫苏糖醇，继续反应；

（5）加入与载体蛋白等量的(2-氯乙基)-二甲基氯化铵，继续烷基化反应；

（6）加入20-200ul巯基乙醇终止反应，得到模拟二甲基化修饰的载体蛋白，记为Kc[me2]；

（三）混合载体蛋白Kc[me1]和载体蛋白Kc[me2]，混合物免疫兔子，得到血清抗体，即泛一、二甲基化抗体。