[发明专利]一种能促进白三叶地上组织生长的高效解磷菌及其应用

说明书

本发明公开了一种能促进白三叶地上组织生长的高效溶磷菌，其分类命名为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)；菌株号为BS1；保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.11788，保藏日期为2015年12月04日。将该高效溶磷菌BS1接种于白三叶后，对白三叶地上组织具有极显著的促生作用。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一种能促进白三叶地上组织生长的高效解磷菌及其应用。

背景技术

磷元素作为植物生长所必需的营养元素参与着植物的代谢活动，并且对于植物具有增强抗逆性、促进生长等作用。研究表明，土壤中的可利用的磷元素很难满足植物生长对磷元素的需求量，而且磷肥中很大一部分磷元素都与Fe²⁺、Fe³⁺、Ca²⁺和Al³⁺等阳离子结合形成很难被植物吸收的难溶解的磷酸盐化合物^[1-2]。因此，如何提高植物对磷元素的利用率，对于植物的生长及土壤环境的改善都具有重要的意义。

溶磷菌作为植物根际有益的微生物可将难溶性磷转化为植物可以吸收的磷元素，对于改良土壤环境及促进植物生长均具有重要的意义。一些高效溶磷菌一方面具有分泌植物激素的能力，从而促进植物的生长；另一方面其较高的溶磷能力可以促进植物对无机磷及有机磷的吸收，从而满足植物对磷元素的需求，进一步促进植物的生长。因此，对于植物根际溶磷菌的筛选及其促生作用的研究具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种能促进白三叶地上组织生长的高效解磷菌，使其能够实现通过接种白三叶而对白三叶地上组织生长带来显著的促进作用。

本发明这种能促进白三叶地上组织生长的高效解磷菌是从白三叶根际分离出一株高效解磷菌，使用钼蓝比色法测定该菌株溶解磷酸钙的能力，溶磷量为424.85μg·mL^-1，促生实验研究表明该菌株促进白三叶地上部分生长。

根据形态特征观察及生理生化试验结果，查《伯杰细菌鉴定手册》及《常见细菌系统鉴定手册》可知，本发明的高效解磷菌为阴沟肠杆菌Enterobacter cloacae，菌株命名为BS1。

该菌株为发明人与2010年10月在贵州省独山县境内栽培白三叶根际土壤样品中分离获得。该菌株保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.11788，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期为2015年12月04日。

本发明的菌株BS1可用于接种白三叶，能够极显著的促进白三叶地上组织的生长。

本发明所提供的高效溶磷菌接种的方法具体包括以下步骤：

(1)将菌株活化培养，将保存的菌株在PKO培养基上划线，28℃，培养3天，重复培养3次。所述的PKO培养基配制为：Ca₃(PO₄)₂3.0g、(NH4)₂SO₄0.5g、KCl 0.2g、MnSO₄0.03g、FeSO₄·7H₂O 0.003g、NaCl 0.2g、MgSO₄·7H₂O 0.03g、葡萄糖10g、酵母粉0.5g、琼脂15-20g、蒸馏水1000ml，pH 6.8～7.2。

(2)待培养基中长出无杂菌的菌落，挑取单菌落接种于0.5ml的菌悬液于50ml LB培养基中，28℃震荡培养3-5d。所述的LB培养基配制为：蛋白胨10.0g、NaCl 6.0g、酵母粉5.0g、蒸馏水1000ml、pH 6.8～7.2。

(3)白三叶种子经0.1％升汞表面消毒5min后再经75％酒精消毒3min，用无菌水冲洗干净。