[发明专利]一种奇异变形杆菌-金黄色葡萄球菌-铜绿假单胞菌吸附联合疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种奇异变形杆菌-金黄色葡萄球菌-铜绿假单胞菌吸附联合疫苗（PSP吸附联合疫苗）制备方法，采用多株奇异变形杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌进行制备而成，其特征在于有以下步骤：

（1）奇异变形杆菌胞膜可溶性抗原原液制备；

（2）金黄色葡萄球菌胞质抗原原液制备；

（3）金黄色葡萄球菌类毒素原液制备；

（4）铜绿假单胞菌类毒素原液制备；

（5）奇异变形杆菌6价抗原混合液制备；

（6）奇异变形杆菌-金黄色葡萄球菌-铜绿假单胞菌吸附联合疫苗（PSP吸附联合疫苗）制备。

2.根据权利要求1所述的一种奇异变形杆菌-金黄色葡萄球菌-铜绿假单胞菌吸附联合疫苗（PSP吸附联合疫苗）制备方法，其特征在于步骤（1）奇异变形杆菌胞膜可溶性抗原原液制备：是指奇异变形杆菌经过高密度培养、在位消化、离心、预过滤、超滤、乙醇沉淀、除菌过滤制备而成的，在位消化是由胰酶消化获得的，在位消化过程中，4.0～6.0×10⁹个/ml细菌浓度加入1～2g胰酶，超滤所使用的超滤膜包孔径为10～30KD。

3.根据权利要求1所述的一种奇异变形杆菌-金黄色葡萄球菌-铜绿假单胞菌吸附联合疫苗（PSP吸附联合疫苗）制备方法，其特征在于步骤（2）金黄色葡萄球菌胞质抗原原液制备：是指由金黄色葡萄球菌经过高密度培养、离心、机械破碎、离心、等电点沉淀1、等电点沉淀2、酶解、透析、除菌过滤步骤获得的，机械破碎使用的玻璃珠粒径为0.45～0.6mm，破碎率不低于80%，等电点沉淀1要求pH为3.0～4.5，等电点沉淀2要求pH为4.5～6.0，酶解使用胰蛋白酶含量为:1L,60～100mg/L总氮对应1～10mg胰蛋白酶，透析使用透析袋孔径为1～10KD。

4.根据权利要求1所述的一种奇异变形杆菌-金黄色葡萄球菌-铜绿假单胞菌吸附联合疫苗（PSP吸附联合疫苗）制备方法，其特征在于步骤（3）金黄色葡萄球菌类毒素原液制备：是指由金黄色葡萄球菌经过高密度培养、离心、脱毒、超滤、酸沉淀、离心、除菌过滤骤获得的，脱毒使用0.4%～1.0%甲醛或戊二醛、pH6.8～7.2、30～37℃脱毒5～7天，超滤使用超滤脓包孔径为10～30KD，酸沉淀中含有氯化钠浓度为0-30%，pH为3.0～5.0。

5.根据权利要求1所述的一种奇异变形杆菌-金黄色葡萄球菌-铜绿假单胞菌吸附联合疫苗（PSP吸附联合疫苗）制备方法，其特征在于步骤（4）铜绿假单胞菌类毒素原液制备：是指由铜绿假单胞菌经过高密度培养、离心、脱毒、超滤1、超滤2、除菌过滤步骤获得的，脱毒使用0.4～1.0%甲醛或戊二醛、pH6.8～7.2、30～37℃脱毒12～15天，超滤1使用超滤脓包孔径为300～1000KD，超滤2使用超滤脓包孔径为10～30KD。

6.根据权利要求1所述的一种奇异变形杆菌-金黄色葡萄球菌-铜绿假单胞菌吸附联合疫苗（PSP吸附联合疫苗）制备方法，其特征在于步骤（5）奇异变形杆菌6价抗原混合液制备：是指将6株奇异变形杆菌胞膜可溶性抗原根据抗原浓度按照1：1：1：1：1：1进行配伍混合而成。

7.根据权利要求1所述的一种奇异变形杆菌-金黄色葡萄球菌-铜绿假单胞菌吸附联合疫苗（PSP吸附联合疫苗）制备方法，其特征在于步骤（6）奇异变形杆菌-金黄色葡萄球菌-铜绿假单胞菌吸附联合疫苗（PSP吸附联合疫苗）制备：是指将6价奇异变形杆菌胞膜可溶性抗原、金黄色葡萄球菌胞质抗原、金黄色葡萄球菌类毒素、铜绿假单胞菌类毒素、铝凝胶及无机盐组成按照一定比例混合，6价奇异变形杆菌胞膜可溶性抗原在吸附联合疫苗中浓度为48μg/ml～60μg/ml，其中每一株奇异变形杆菌的单一浓度为8～10ug/ml，金黄色葡萄球菌胞质抗原在吸附联合疫苗中浓度为0.8mg～1.2mg/ml；金黄色葡萄球菌类毒素在吸附联合疫苗中浓度为3EC/ml～8EC/ml，铜绿假单胞菌类毒素在吸附联合疫苗中浓度为20μg/ml～50μg/ml，氢氧化铝凝胶在吸附联合疫苗中浓度为0.8mg～1.2mg/ml；吸附联合疫苗pH为6.8～7.5，疫苗中佐剂为铝凝胶，是指氢氧化铝凝胶、磷酸铝凝胶或氧化铝凝胶，或按照配方自制符合药典标准的铝凝胶。