[发明专利]一种检测活细胞内RhoGDIα蛋白活性的生物探针

权利要求书

1.一种检测活细胞内RhoGDIα蛋白活性的生物探针，其特征在于，该生物探针为融合的蛋白质结构，包括FRET荧光蛋白对ECFP(1-1)与Ypet(1-5)，RhoGDIα全长序列(1-4)，RhoGDIα的底物结构域switch II(1-2)及linker序列(1-3)五个部分；FRET荧光蛋白对ECFP(1-1)、RhoGDIα的底物结构域switch II(1-2)、linker序列(1-3)、RhoGDIα全长序列(1-4)和Ypet(1-5)依次连接；

其中，RhoGDIα全长序列的氨基酸序列如下：

MAEQEPTAEQLAQIAAENEEDEHSVNYKPPAQKSIQEIQELDKDDESLRKYKEALLGRVAVSADPNVPNVIVTRLTLVCSTAPGPLELDLTGDLESFKKQSFVLKEGVEYRIKISFRVNREIVSGMKYIQHTYRKGVKIDKTDYMVGSYGPRAEEYEFLTPMEEAPKGMLARGSYNIKSRFTDDDKTDHLSWEWNLTIKKEWKD

其对应的DNA序列为：

ATGGCAGAACAGGAACCCACTGCTGAGCAGCTCGCTCAGATAGCTGCAGAGAATGAGGAAGACGAGCACTCTGTGAACTACAAGCCTCCAGCCCAGAAGAGCATCCAGGAGATCCAGGAACTGGACAAGGATGATGAAAGCCTTCGAAAGTACAAGGAGGCCCTGCTGGGCCGAGTAGCTGTCTCTGCAGACCCCAATGTCCCCAACGTCATTGTGACCCGCTTGACCTTGGTGTGCAGCACTGCCCCAGGCCCTCTGGAACTGGACCTGACAGGTGATCTGGAGAGCTTCAAGAAACAGTCATTTGTGTTGAAGGAAGGTGTGGAGTACCGGATAAAAATCTCTTTCCGGGTGAACAGAGAGATCGTGTCAGGCATGAAGTACATCCAGCACACATACAGGAAAGGGGTCAAAATTGACAAGACTGACTACATGGTCGGGAGCTATGGGCCAAGGGCTGAGGAGTATGAGTTCCTGACACCCATGGAAGAGGCCCCCAAAGGCATGCTTGCTCGGGGCAGTTACAACATCAAGTCCCGCTTCACAGATGATGACAAAACTGACCACCTGTCCTGGGAGTGGAATCTCACCATCAAAAAGGAATGGAAGGACTGA；

RhoGDIα的底物结构域switch II的氨基酸序列全长：

DTAGQEDYDRLRPLS

对应的DNA序列为：

GATACTGCAGGGCAAGAGGATTATGACAGACTACGACCGTTATCC；

Linker氨基酸序列为：GGSGGT

对应的DNA序列为：GGTGGCTCTGGCGGTACT。

2.根据权利要求1所述的生物探针的应用，其特征在于，该生物探针的融合质粒转入活细胞内，由细胞自行表达出探针的融合蛋白结构，在活细胞内通过FRET荧光显微镜动态检测RhoGDIα蛋白活性及分布情况变化。