[发明专利]表达传染性法氏囊病毒VP2基因的重组鸡马立克氏病病毒疫苗株及其构建方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种重组鸡马立克氏病病毒疫苗株及其构建方法和应用，特别涉及一种表达传染性法氏囊病毒VP2基因的重组鸡马立克氏病病毒疫苗株及其构建方法和应用，本发明属于医学或兽医学技术领域。

背景技术

我国是一个养禽大国。鸡传染性法氏囊病和马立克氏病是危害我国养禽业健康发展的两种最为重要的免疫抑制性传染病，其广泛流行给我国养禽业带来了巨大的经济损失。

鸡传染性法氏囊病(IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的一种主要危害3-6周龄雏鸡的急性、高度接触性传染病。本病于1957年首发于美国Gumboro地区，被称为“甘布罗病”；由Cosgrove于1962年首先报道，由于死于该病的鸡的肾脏严重肿大，因此也称为“禽肾病”。60年来，该病一直威胁着养禽业的发展。抗原变异、免疫抑制，特别是超强毒株(vvIBDV)的出现，使得该病的防控形势更加严峻。国际兽医局(OIE)认为IBD已经成为影响社会经济的重要疾病。IBDV基因组由两个双股RNA节段组成，分别为A节段和B节段。A节段编码的VP2蛋白构成病毒的外衣壳，是IBDV的主要结构蛋白。VP2可以诱导机体产生中和抗体，是IBDV主要的宿主保护性抗原(Heine H G,Boyle,D B.Infectious bursal disease virus structural protein VP2expressed by a fowlpox virus recombinant confers protection against disease in chickens.Arch Virol,1993,131:277-292.)。疫苗免疫是防控vvIBDV的主要手段，但vvIBDV致病性强且不适应细胞培养，疫苗株的获得只能通过将野生vvIBDV在鸡胚或CEF细胞上传代致弱。这种传统的驯化方法费时费力，且结果带有随机性(Gao L,Qi X,Li K,Gao H,Gao Y,Qin L,Wang Y,Wang X.Development of a tailored vaccine against challenge with very virulent infectious bursal disease virus of chickens using reverse genetics.Vaccine 2011,29:5550-5557.)。对于高致病力的、易变异的vvIBDV的防控，特别是突发疫情的防控，开展新型疫苗的快速构建研究迫在眉睫。

马立克氏病(MD)是由马立克氏病病毒(MDV)引起的一种鸡的传染性肿瘤病，以淋巴组织增生和肿瘤形成为特征。马立克氏病是鸡的主要疾病之一，也是国内外50年代以来最受重视的鸡病。MDV属于α-疱疹病毒亚科马立克氏病样病毒属，是一种细胞结合性疱疹病毒，其基因组为线状双股DNA，约为180kb。MDV至少编码103个蛋白质，然而大多数蛋白仍未得到鉴定。MDV包括三种血清型，血清1型病毒具有致瘤性，可进一步分为几个病理型，包括温和型MDV(mMDV)、强毒型MDV(vMDV)、超强毒型MDV(vvMDV)及特超强毒型MDV(vv+MDV)病毒株。鸡的非致瘤病毒分离株和火鸡疱疹病毒分离株分别称作血清2型和3型MDV。目前用于预防MD的疫苗主要是血清1型弱毒疫苗，常用的疫苗株有荷兰的CVI988株和我国的814疫苗株。其中，814疫苗株性状稳定，是一株自然弱毒株，该疫苗株自从上世纪80年代研制成功以来，已安全使用30余年，没有任何不良反应。814疫苗株具有良好的免疫原性，保护效果与CVI988/Rispens株相当。814疫苗株还是我国自主研制的，唯一有效应用的、具有自主产权的MD疫苗。

IBDV和MDV的感染不仅可以造成感染鸡的发病死亡，还可以引起显著的免疫抑制，造成继发感染和其他多种疫苗的免疫失败。两种病毒的混合感染造成的危害更加严重，也增加了防控的难度。疫苗是控制MD和IBD的主要手段，在种鸡群、蛋鸡群中MD疫苗是必须使用的疫苗，肉鸡群中使用该疫苗可以较大幅度地提高养殖效率。目前用于预防IBD的疫苗主要是传统活疫苗和灭活疫苗，但传统疫苗不仅易于受到母源抗体的干扰，而且具有毒力返强和灭活不彻底的安全隐患。同时，现地IBD弱毒疫苗和中等毒力疫苗的广泛使用不仅造成了鸡群的免疫抑制，还加剧了病毒的变异，因此迫切需要研制更加安全有效的新型IBD疫苗。活载体疫苗诱导机体产生的免疫比较广泛，可以同时表达多种抗原，制成多价或多联疫苗，是当今和未来疫苗研发的主要方向之一。而且，重组活载体疫苗由于不含有完整的目的病毒，因此相对传统疫苗具有更好的安全性。