[发明专利]一种番茄斑萎病毒接种的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种番茄斑萎病毒接种的方法，属植物保护领域。

背景技术：

近年来，番茄斑萎病毒已成为危害番茄生产的重要病害，鉴定和选育抗病品种是防治番茄斑萎病毒的有效途径。大田蓟马传毒和实验室人工接种是番茄品种感染斑萎病毒的两种常用方法。由于番茄的生长特性、传毒蓟马的生活习性及外界环境的限制，大田自然感病鉴定番茄抗性存在时间季节的局限性。而实验室人工接种可常年感染番茄幼苗，从而加快抗病育种进程。

机械摩擦是目前常用的人工接种方法，然而具体操作下来，发现这种接种方式存在以下不足：机械摩擦接种只能每片叶片依次接种，此方法可以满足少量番茄幼苗接种需要，对于需要大量接种鉴定番茄抗性时，则要消耗大量的时间。此外，摩擦接种不易对幼小的叶片进行。因此，急需发明一种改进的快速高效的人工接种方式，加快抗病品种的鉴定和选育。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有人工接种番茄斑萎病毒耗时耗力的问题，而提供一种接种效率和速率高的番茄斑萎病毒接种的方法。

本发明的番茄斑萎病毒接种的方法，其具体步骤如下：

第一步：配置50mMpH7.2的磷酸缓冲液，121℃灭菌20分钟，备用；

第二步：播种番茄，待幼苗长出4片真叶时进行番茄斑萎病毒接种；

第三步：取出保存于-80℃的感染番茄斑萎病毒的番茄叶片，称重后用剪刀剪碎，放到研钵中，按质量:体积＝1:5的比例加入磷酸缓冲液研磨至匀浆状；

第四步：将研磨好的匀浆装入离心管，4℃，5000rpm离心10分钟，取上清液装入塑料小喷壶中；

第五步：取番茄幼苗，将整株番茄浸入超声波清洗仪中的磷酸缓冲液中，200W振荡10秒钟，取出，将塑料小喷壶中含有番茄斑萎病毒的上清液喷洒到超声波处理过的番茄叶片上；

第六步：接种过斑萎病毒的番茄植株置于人工气候箱中，在100％相对湿度，黑暗的条件下培养12小时，之后取出置于常规条件下培养；

本发明的有益效果在于：能够提高番茄幼苗病毒接种的速度，并能使全株番茄叶片感病，快速高效的鉴定番茄对病毒的抗性，加快抗病品种的选育。

具体实施方式：

本实施例的番茄斑萎病毒接种的方法，其具体步骤如下：

第一步：配置50mMpH7.2的磷酸缓冲液，121℃灭菌20分钟，备用；

第二步：播种番茄，待幼苗长出4片真叶时进行番茄斑萎病毒接种；

第三步：取出保存于-80℃的感染番茄斑萎病毒的番茄叶片，称重后用剪刀剪碎，放到研钵中，按质量:体积＝1:5的比例加入磷酸缓冲液研磨至匀浆状；

第四步：将研磨好的匀浆装入离心管，4℃，5000rpm离心10分钟，取上清液装入塑料小喷壶中；

第五步：取番茄幼苗，将整株番茄浸入超声波清洗仪中的磷酸缓冲液中，200W振荡10秒钟，取出，将塑料小喷壶中含有番茄斑萎病毒的上清液喷洒到超声波处理过的番茄叶片上；

第六步：接种过斑萎病毒的番茄植株置于人工气候箱中，在100％相对湿度，黑暗的条件下培养12小时，之后取出置于常规条件下培养；。

实际应用表明白：本方法不仅能够提高番茄幼苗病毒接种的速度，还能使全株番茄叶片感病，快速高效的鉴定番茄对病毒的抗性，加快了抗病品种的选育。