[发明专利]一种蚜虫胚胎观察处理方法

说明书

本发明公开一种蚜虫胚胎观察处理方法，使用全新配制的观察液，该观察液中能使卵巢管壁膜组织增强韧性胚胎不易散落、能使胚胎和细胞中的蛋白沉淀增强视觉效果，从而防止了原有技术使用中出现的卵巢管中胚胎易散落、细胞溶酶体自溶作用造成的无法计数和模糊不清的问题，为以后蚜虫生殖特性差异研究奠定基础。该方法安全、简单、作用速度快，效果明显；对于研究观察中在缺乏特殊成像系统的设备的研究者或研究单位，利用此方法借助普通体视解剖镜即可完成对蚜虫卵巢管数以及每条卵巢管中胚胎数目的计数观察。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种蚜虫胚胎观察处理方法。

背景技术

蚜虫是一个典型的研究生态学、发育学和进化学问题的模式昆虫类群，尤其2010年国际蚜虫基因组联盟对豌豆蚜全基因组序列测定后，为进一步研究进化生物学和发育生物学问题提供了其它生物无可比拟的条件。蚜虫多型现象非常普遍，不仅具有色型和翅型分化，而且还具有生殖多型现象。孤雌生殖和有性生殖是蚜虫的两种繁殖方式。全世界至今已知5000种蚜虫都以孤雌生殖作为其年生活史当中主要的繁殖方式。因孤雌生殖繁殖速度快，世代周期短，世代数目多，导致蚜虫分布广泛、种群数量大、危害严重，也是农业生产上，蚜害问题难以解决的根本原因。

昆虫的生殖系统与昆虫的生殖密切相关。蚜虫种群数量的大小取决于其生殖力的大小，而卵巢小管数目和每个卵巢管中所产生的胚胎数是衡量蚜虫潜在生殖力的重要参数，而潜在生殖力是决定蚜虫种群数量大小的重要影响因子。对蚜虫胚胎学的研究，有助于了解蚜虫胚胎的形成过程和个体不同发育时期对生殖系统的影响、有助于了解同种蚜虫不同生物型的生殖和生态功能的差异、有助于了解不同种蚜虫生物学差异、有助于了解不同环境条件对蚜虫生殖发育的影响，有助于了解蚜虫不同地理种群的生物学差异，从而为研究生物进化和蚜虫的致灾机理奠定基础。而现在并没有一种用于观察蚜虫胚胎蚜虫胚胎的观察液和处理方法，蚜虫胚胎的观察手段依旧比较落后。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术缺陷，避免因为使用溶液的渗透作用导致的胚胎吸涨造成的卵巢管破裂和不完整性，以及胚胎组织内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶作用造成的视觉模糊和成像不清楚的缺陷,以及溶液溶剂蒸发导致的盐渍问题；本发明提供了一种简单有效的胚胎组织处理方法，通过本方法可以简便有效的观察和计数，同时有利于成像。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一、观察液的配制

(1)观察液配比为：醇类10-30份；乙酸乙酯1-5份；油类1-5份。

进一步的，观察液配比为：无水乙醇20份，乙酸乙酯1份，甘油1份。

进一步的，观察液制备方法为：

步骤一：常温常压下，使用移液器取无水乙醇20份，乙酸乙酯1份，甘油1份置入广口瓶中。

步骤二：将步骤一所述混合液摇匀，置于常温密封干燥条件下保存。

(2)具体制备方法

二、一种简单有效的蚜虫胚胎学组织观察处理方法，包括如下步骤：

(1)在凹形载玻片上使用滴管滴一滴蒸馏水，将一头不同龄期的无翅或有翅蚜虫用细毛笔移入凹形载玻片水中，以防止蚜虫逃逸；备用。

(2)在双目体视解剖镜下，用两支0号昆虫针将蚜虫腹面朝上，一个昆虫针固定于蚜虫中胸腹板，另一只昆虫针沿腹部中央从前往后将蚜虫腹部腹面轻轻剖开，用昆虫针摁住生殖腹板将卵巢全部拉出，去除母体虫壳等杂物。

(3)滴加2滴配制好的观察液，将胚胎组织完全浸没，立刻就会使卵巢管和胚胎的轮廓更加清晰，视觉效果提升。

(4)在双目解剖镜下即可计数卵巢管及每管胚胎数或在成像系统下照相。

本发明的有益效果：