[发明专利]一种青蒿PDR亚家族转运蛋白及其功能验证方法和应用

权利要求书

1.一种青蒿PDR亚家族转运蛋白的功能验证方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)从青蒿cDNA文库中克隆到所述青蒿PDR亚家族转运蛋白的核酸序列SEQ ID NO:1所示，即AaPDR1基因；

(2)把AaPDR1基因可操作性地连接于酵母表达调控序列，形成含AaPDR1基因的酵母表达载体；

(3)将含所述AaPDR1基因的酵母表达载体转入酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)AD12345678，得到转基因酵母菌，所述转基因酵母菌获得了二氢青蒿酸外排的功能，从而验证了所述青蒿PDR亚家族转运蛋白具有外排二氢青蒿酸的功能。

2.一种青蒿PDR亚家族转运蛋白的功能验证方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)从青蒿cDNA文库中克隆到所述青蒿PDR亚家族转运蛋白的核酸序列，如SEQ ID NO:1所示，即AaPDR1基因；

(2)把AaPDR1基因可操作性地连接于表达调控序列，形成含AaPDR1基因的植物反义干扰表达载体；

(3)将含所述AaPDR1基因的植物反义干扰表达载体转化根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)EH105，获得具有所述干扰表达载体的根癌农杆菌菌株；

(4)利用所述步骤3构建的根癌农杆菌菌株转化青蒿，经卡那霉素筛选得到抗性苗，再经PCR检测为阳性的植株即为转基因青蒿；

(5)对获得的所述转基因青蒿进行青蒿素、二氢青蒿酸和青蒿酸含量测定，进而获得青蒿素合成受抑制的青蒿植株，从而验证了所述青蒿PDR亚家族转运蛋白具有影响青蒿素合成的功能。

3.一种青蒿PDR亚家族转运蛋白的功能验证方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)从青蒿cDNA文库中克隆到所述青蒿PDR亚家族转运蛋白的核酸序列，如SEQ ID NO:1所示，即AaPDR1基因；

(2)把AaPDR1基因可操作性地连接于酵母表达调控序列，形成含AaPDR1基因的酵母表达载体；

(3)将含所述AaPDR1基因的酵母表达载体转入酿酒酵母AD12345678，得到转基因酵母菌，所述转基因酵母菌获得了二氢青蒿酸外排的功能，从而验证了所述青蒿PDR亚家族转运蛋白具有外排二氢青蒿酸的功能；

(4)把AaPDR1基因可操作性地连接于表达调控序列，形成含AaPDR1基因的植物反义干扰表达载体；

(5)将含所述AaPDR1基因的植物反义干扰表达载体转化根癌农杆菌EH105，获得具有所述干扰表达载体的根癌农杆菌菌株；

(6)利用所述步骤5构建的根癌农杆菌菌株转化青蒿，经卡那霉素筛选得到抗性苗，再经PCR检测为阳性的植株即为转基因青蒿；

(7)对获得的所述转基因青蒿进行青蒿素、二氢青蒿酸和青蒿酸含量测定，进而获得青蒿素合成受抑制的青蒿植株，从而验证了所述青蒿PDR亚家族转运蛋白具有影响青蒿素合成的功能。

4.一种如权利要求2或3任一项所述的青蒿PDR亚家族转运蛋白的功能验证方法，其特征在于，所述转化根癌农杆菌EH105的具体方法是采用冻融法进行转化。

5.一种青蒿PDR亚家族转运蛋白在提高青蒿素含量的青蒿育种中的应用，其特征在于，所述青蒿PDR亚家族转运蛋白具有以下特征：所述青蒿PDR亚家族转运蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

6.一种青蒿PDR亚家族转运蛋白在制备抗疟疾药物中的应用，其特征在于，所述青蒿PDR亚家族转运蛋白具有以下特征：所述青蒿PDR亚家族转运蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNO:2所示。