[发明专利]一种含有重组乙肝病毒基因的真核汉逊酵母工程菌的构建及乙肝表面抗原的生产方法

说明书

本发明公开一种含有重组乙肝病毒基因的真核汉逊酵母工程菌的构建及乙肝表面抗原的生产方法，属于生物工程技术领域，构建方法包括：步骤1，构建含有重组乙型肝炎病毒HBsAg基因的质粒pHPZF1.0‑ZS；步骤2，筛选得到表达水平最高的含有重组乙肝病毒HBsAg基因的真核汉逊酵母工程菌。采用本发明所述构建及生产方法，可以获得的乙型肝炎表面抗原汉逊酵母酵母工程菌株能够以甲醇诱导型方式稳定和高效地表达HBsAg重组蛋白，适用于规模化生产HBsAg重组蛋白。

技术领域

本发明涉及一种含有重组乙肝病毒基因的真核汉逊酵母工程菌的构建及乙肝表面抗原的生产方法，属于生物工程技术领域。

背景技术

乙型肝炎(简称乙肝)疫苗已大规模使用愈20年，但乙型肝炎病毒(HepatitisBvirus，HBV)感染仍是最为严重的全球性健康问题之一。据世界卫生组织报道，全世界约20亿人有现状或既往乙肝病毒感染标志，每年约有60万人死于HBV感染引起的肝衰竭、肝硬化和肝细胞癌。我国乙肝病毒携带者超过1亿，现有患者超过2000万，南方流行重于北方，农村重于城市。目前并无特异性治疗乙肝的药物，最有效的手段就是接种乙肝疫苗。

第一代乙肝疫苗为血源疫苗，采用无症状带毒者(HBsAg阳性)血浆为原料制备。由于提取方法不同，所得成分也有差别，但均含提纯的22nm小颗粒乙型肝炎表面抗原。80年代以来开始研制第二代乙肝疫苗，系将S基因编码的226个氨基酸产物装配而成的抗原颗粒，采用基因工程方法在哺乳动物细胞和重组酵母中均能表达。重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母)乙肝疫苗是最新一代基因工程乙肝疫苗，是继血源疫苗、酿酒酵母疫苗之后的第三代疫苗，系国家863重大科技攻关成果，已有2000万名受种者验证了其安全性。对HBsAg阳性母亲所生新生儿，本市已将母婴阻断率较高的重组(汉逊酵母)乙肝疫苗纳入免疫规划，在出生12小时内给予免费接种；在本地的临床观察中，健康成人全程接种后1个月，97.46％的受种者抗体阳转；全程接种后半年，59.8％的受种者抗体水平在1000mIU/mL以上，因而保护期更长。按照世界卫生组织资料，不同乙肝疫苗的相对效力不以HBsAg含量来判断，10ug重组(汉逊酵母)疫苗适用于任意年龄的易感人群，能提供全面高效持久的免疫保护屏障。免疫预防为主，有效遏制乙肝的高流行状态，基因重组(汉逊酵母)技术为乙型肝炎的免疫预防提供了一种全新的选择。