[发明专利]一株高活性饲用植物乳杆菌及其培养方法和应用

说明书

技术领域：

本发明属于乳酸菌培养技术领域，涉及一株高活性饲用植物乳杆菌及其培养方法和应用。

背景技术：

植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）是农业部《饲料添加剂品种目录》所列菌种，属于人及动物肠道中的正常菌群，进入肠道后可有效定殖。植物乳杆菌代谢碳水化合物产生乳酸，有利于降低肠道环境pH，抑制有害菌的生长。植物乳杆菌代谢过程中还会产生过氧化氢，细菌素等物质，对致病菌有一定的杀灭作用，而且不会有药物残留。鉴于植物乳杆菌的以上特性，越来越多的厂家选择其作为微生态制剂产品的生产菌种之一。

传统的乳酸菌发酵多选用MRS培养基，价格昂贵，发酵后的活菌数低于1×10⁹CFU/mL，在益生菌有效使用剂量固定的情况下，低发酵水平等于变相的增加了成本。低成本的培养基，高效的可放大的发酵工艺对于推进益生菌产品的产业化有重大指导及实践意义。

总之，筛选一株高活性植物乳杆菌，并开发一种低成本、高产量，能长期保持活性的植物乳杆菌微生态制剂，对于发展绿色饲料，保证食品安全具有重要的意义。

发明内容：

（一）发明目的：

本发明的第一个目的是提供一株饲用植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）WEI-70 CGMCC No.11747。

采集60日龄健康仔猪的粪便，从中分离、筛选，鉴定出一株植物乳杆菌Lactobacillus plantarum，命名为WEI-70，并于2015年11月26日送中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC No. 11747，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院 中科院微生物研究所 邮编: 100101 电话：86-10-64807596。

植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）WEI-70 CGMCC No.11747为革兰氏阳性细菌，圆端杆状，，无芽孢，无鞭毛；兼性厌氧，最适生长温度为30-40 ℃，最适pH为6.0-7.0。在MRS培养基中培养20 h以上，活菌数可接近1×10⁹ CFU/mL。

本发明的第二个目的是提供植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）WEI-70 CGMCC No.11747的高密度液体培养方法。

本发明提供的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）WEI-70 CGMCC No.11747的高密度液体培养方法，是将该菌接种至专用的液体培养基进行培养，液体培养基的主要成分如下：

麦芽糊精20 g/L、玉米浆粉32 g/L，三水合乙酸钠3 g/L，三水合磷酸氢二钾2 g/L，柠檬酸铵2 g/L，七水合硫酸镁0.6 g/L，一水合硫酸锰0.1 g/L、吐温80 1 g/L，pH值为6.5。

在上述培养方法中，接种比例为1%；培养温度为34-37 ℃；静置或不通气培养，培养时间为16-20 h。

在50 L发酵罐条件下，利用上述培养基在37 ℃，转速100 rpm，不通气的条件下发酵24 h后获得的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）WEI-70 CGMCC No.11747的发酵液的活菌数可达到5.0×10⁹-6.0×10⁹ CFU/mL。而同样条件下，植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）WEI-70 CGMCC No.11747在MRS培养基中培养后的活菌数只有9.2×10⁸ CFU/mL，优化后的培养基使活菌数提高了5倍以上。

本发明的第三个目的是提供植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）WEI-70 CGMCC No.11747作为微生态制剂的制备方法，将菌种经一级种子摇瓶和50 L发酵罐富集后的发酵液通过高速管式离心机收集菌泥，与菌体保护剂混合均匀，先于-70℃预冻4-5 h，然后置于真空冷冻干燥机中，在以下冻干参数下进行冻干：真空度小于30 Pa，冷阱温度为-40℃至-50℃，冻干41 h，干燥后获得活性菌粉，将菌粉用粉碎机破碎后与同样粒度的玉米芯粉混合，获得微生态制剂产品。

所述高速管式离心机收集菌体的转速为15000-20000 rpm。

所述菌体保护剂配方为：每1000 mL水中含有：脱脂奶粉 100 g，谷氨酸钠10 g，海藻糖10 g，甘油30 g。

所述菌泥与菌体保护剂的质量体积比为1:5。