[发明专利]一种基于Fe2O3纳米粒子的病毒快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种病毒的快速检测方法。

背景技术

基本原理：单克隆抗体或抗原分子与酶分子通过共价键结合，这种结合不会改变 单克隆抗体、抗原和酶的免疫学特性及生物活性，特异性的单克隆抗体只会与特异性的抗 原结合。Fe₂O₃材料具有铁磁性，当粒子直径小到一定程度会出现超顺磁特性，即没有外加磁 场时没有磁性，而在有外加磁场时表现出一定的磁性，可以用于磁分离。因此可以构建顺磁 性的特异性Fe₂O₃纳米探针生物传感器来做检测。

其主要的原理步骤：1.检测病毒的特异性顺磁纳米Fe₂O₃探针的制备。从市场上购 买纳米Fe₂O₃材料，也可以通过其他方法制备纳米级的Fe₂O₃。使用硅烷偶联剂，其通式为:Y (CH₂)nSiX₃。此处，n为0-3；X为可水解的基团；Y为有机官能团。X通常是氯基、甲氧基、乙氧 基、乙酰氧基等，这些基团水解时即生成硅醇(Si(OH)₃)，而与无机物质结合，形成硅氧烷。Y 是乙烯基、氨基、环氧基、甲基丙烯酰氧基、巯基。这些反应基团可与有机物质反应而结合。 因此，通过使用硅烷偶联剂，可在无机物质和有机物质的界面之间架起“分子桥”，把两种性 质悬殊的材料连接在一起提高复合材料的性能和增加粘接强度的作用。通过修饰抗体可实 现表面功能化，形成特异性免疫探针，再封闭多余的活性位点。2.将另一部分病毒的单克 隆抗体固定在酶标板表面，并将多余活性位点封闭。3.将制备的特异性免疫磁珠用于抓取 富集病毒，通过外加磁场将磁珠分离出来，此时，结合了病毒的磁珠和没有结合病毒的磁珠 还是混在一起。4.将上述混在一起的磁珠，加到第2步的酶标板表面，则抓取了病毒的磁珠 将与酶标板表面单克隆抗体发生特异性结合，形成双抗夹心，用无菌的去离子水清洗可以 将未发生结合的磁珠洗脱。5.再采用洗脱剂将固定载体上的结合的特异性纳米免疫磁珠 洗下来，清洗掉离子、溶剂。此部分磁珠如果存在，就是抓取了病毒的磁珠。6.加入硝酸和盐 酸（1：3体积比）进行硝化反应，这部分磁珠如果存在，则Fe₂O₃转化为三价铁离子和二价铁 离子。通过检测是否存在铁离子就可以检测出样品中是否存在病毒。通过加标，在一定范围 内可以定量检测病毒。该方法的主要优点就是快速、灵敏度相对较高。相对于病毒的微生物 培养2-3天甚至几天的时间。此方法主要取决于样品的预处理时间。因此，用该方法可做大 规模待检样品的阳性筛选，检出的阳性样还需用微生物培养进行确证。该方法的主要优点 就是快速、灵敏度高。因此，用该方法可做大规模待检样品的阳性筛选，一定程度上可以定 量检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于Fe₂O₃纳米粒子病毒快速检测方法，用于对各种不同 样品进行评价，该方法是一种客观有效的检出病毒的方法，从而在某种程度上大大缩减了 病毒的检测时间。

一种基于Fe₂O₃纳米粒子的病毒快速检测方法，通过分离捕获的免疫磁珠，使其转 化为铁离子，提出铁离子与病毒的相关性指标，通过检测铁离子来间接定量病毒。

该方法采用偶联了特异性单克隆抗体的免疫磁珠，可以将样品中的病毒进行富 集；通过设计双抗夹心分离捕获到病毒的磁珠，再将磁珠硝化反应转化为三价铁离子和二 价铁离子。采用邻二氮菲吸光光度法、硫氰酸钾比色法等检测出铁离子的量，从而算出磁珠 的量，通过加标定量磁珠而在一定程度间接定量出病毒的量。通过定量分析捕获病毒的磁 珠含量，从而可以间接定量出食品样品中的病毒含量。检测出的病毒含量与磁珠含量线性 相关，拟合度较好。最终以免疫磁珠与病毒间的对应关系为纽带，确定食品样品中的病毒的 量。

本发明是这样实现的，步骤如下。

（1）检测病毒的特异性免疫磁珠的制备。

（2）将病毒单克隆抗体固定在酶标板表面。