[发明专利]水稻生殖发育基因MMD2的应用及恢复水稻雄性不育的方法

权利要求书

1.一种水稻雄性生殖发育相关基因MMD2的应用，其特征在于，所述的应用包括：通过基因变异或抑制表达获得水稻雄性不育系或/和用水稻雄性不育系生产种子；所述变异或抑制的目的基因为MMD2；

所述水稻雄性生殖发育相关基因MMD2的基因全长序列如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种恢复基因MMD2功能缺失导致的水稻雄性不育的方法，其特征在于，包括如下步骤：将所述基因MMD2转入水稻雄性不育株系，即可恢复所述不育株系的野生型表型；

其中，所述水稻雄性不育株系是通过MMD2基因变异或抑制其表达获得的；

所述水稻雄性生殖发育相关基因MMD2的基因全长序列如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求2所述的恢复所述基因MMD2功能缺失导致的水稻雄性不育的方法，其特征在于，所述方法具体为：将含MMD2互补构建的根癌农杆菌转入所述水稻雄性不育株系，培育，即得；

其中，MMD2互补构建含有如SEQ ID NO. 3所示的核苷酸序列。

4.根据权利要求3所述的恢复所述基因MMD2功能缺失导致的水稻雄性不育的方法，其特征在于，所述方法具体为：

（a）从水稻BAC克隆中扩增出MMD2基因的如SEQ ID NO.3所示的序列片段；

（b）将所述序列片段导入根癌农杆菌，得MMD2互补根癌农杆菌；

（c）将所述根癌农杆菌与水稻雄性不育株系的细胞或组织或器官接触，从而使编码如SEQ ID NO.2所示氨基酸的核苷酸转入细胞，并且整合到水稻雄性不育株系的染色体上；

（d）选择转入所述核苷酸的水稻细胞或组织或器官，再生，即可。

5. 根据权利要求4所述的恢复所述基因MMD2功能缺失导致的水稻雄性不育的方法，其特征在于，步骤（a）中，所述扩增采用的引物如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示。

6.根据权利要求4所述的恢复所述基因MMD2功能缺失导致的水稻雄性不育的方法，其特征在于，步骤（b）中，所述导入的载体采用双元载体pCAMBIA1301。

7. 根据权利要求3或4所述的恢复所述基因MMD2功能缺失导致的水稻雄性不育的方法，其特征在于，所述根癌农杆菌具体指根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）EHA105CGMCC No.4819。

8.一种抑制水稻雄性生殖发育相关基因MMD2表达的RNAi载体，其特征在于，通过如下方法构建：扩增基因MMD2编码区序列第677位至第965位特异性片段，插入pBluescript SK载体，验证正确后将其切下，再把特异性片段连入pHB载体，即得。