[发明专利]一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的维生素K1的快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及电化学分析领域，特别是涉及一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的 维生素K1的快速检测方法。

背景技术

统计显示，新生儿维生素K缺乏的发病率为4/万～10/万活产儿，多发生在农村，以 颅内出血最常见，约占60%～80%。晚发性维生素缺乏症多于2周龄～3月龄新生儿，尤其多见 于1月龄左右的母乳喂养儿。另一方面，新生儿出生后1个月正好是接种乙肝疫苗第2剂，若 对有维生素K缺乏症的婴儿接种乙肝疫苗，常会出现注射部位出血不止，最后可能出现颅 内出血，治疗不及时造成婴儿死亡，相关新生儿接种乙肝疫苗后偶合晚发性维生素K缺乏病并发颅内出血的病例屡见报道。除此以外，其他疫苗的注射也有可能因为维生素K的缺乏导 致局部出血或注射部位流血，产生疫苗注射后耦合性出血。

新生儿出血症的临床表现多样，且多伴发其他新生儿疾病，故部分患儿在临床上 往往难于诊断和鉴别，因此在疫苗注射前，对于维生素K的及时检测，对提前预防疫苗耦合 性出血具有重要意义。

维生素K1又称凝血维生素，它的缺乏容易导致新生儿出血症，它的传统检测方法 包括高效液相色谱法、紫外分光光度法、毛细管电泳法、电化学分析法等。传统电化学分析 法的缺点，一是多采用汞电极，虽然重现性较好，但是汞蒸汽有毒，二是固体电极的富集量 和重现性较差。

发明内容

根据以上技术问题，本发明提供一种用于预防疫苗注射后耦合性出血的维生素K1 的快速检测方法，其具体操作方法为：

（1）电极制备：所述电极采用纳米二氧化钛修饰玻碳电极，所述纳米二氧化钛修饰玻碳 电极的制备方法为，将玻碳电极用0.1~0.2μm的三氧化二铝粉抛光，将纳米二氧化钛按照 12g/L的浓度进行配置，纳米二氧化钛粒径为15到17nm之间，选择超声法对二氧化钛溶液进 行分散30min，形成乳白色分散液，选择15μl分散液作为最佳覆盖量，具体方法是将15μl上 述分散液滴加在玻碳电极表面，室温下风干，重复两次；

（2）利用电极进行测试，制作10支修饰电极，检测浓度为1.0ng/ml的维生素K1标准液, 得到的电流的平均值为7.597±0.14μA（n=10,RSD=1.85%），然后利用伏安法进行维生素K1 检测；

（3）建立标准曲线：配制不同维生素K1含量的标准溶液，加入支持电解液中，通入高纯 氮气除氧，用电化学工作站对每个标准溶液进行电压扫描，用标准溶液于-0.45V处的峰 电流值与维生素K1含量建立标准曲线，维生素K1标准品的纯度为99%；

（4）样品的制备和测定：将4ml人血样品置7ml的塑料离心管中，高速离心10min,转速 5000rpm，取上清液于35~40摄氏度水浴上用氮吹仪吹干，残余用5.0mol/LNaAc-HAc缓冲液 2ml溶解，待用，将被测样品加入支持电解液中，样品液用氮气纯化10min,在与建立标准曲 线相同的条件下测定其于-0.45V处的峰电流值，由标准曲线得到该峰电流值对应的维生 素K1含量即为被测样品的维生素K1含量。

所述电极为玻碳电极，所述玻碳电极基体上包覆有一层纳米二氧化钛层。

所述纳米二氧化钛层的纳米二氧化钛粒径为15到17nm之间。

所述纳米二氧化钛层的制备方法是，将玻碳电极用0.1~0.2μm的三氧化二铝粉抛 光，选择超声法对二氧化钛进行分散30min，形成二氧化钛分散液，选择15μl，含纳米二氧化 钛12g/L的乳白色分散液作为最佳覆盖量。具体方法是将15μl上述分散液均匀滴加在玻碳 电极表面，室温下风干，重复两次。

所述电解液浓度为5.0mol/LNaAc-HAc，所述脉冲伏安法的扫描速度为30mV/s， 富集电位为-0.45V，富集时间为100s，扫描起止电位-0.3V~-0.8V，脉冲高度0.05V，脉冲宽 度0.04s，电位阶跃0.006V。

所述电化学工作站的工作特征是三电极体系，覆纳米二氧化钛玻碳电极为工作电 极，饱和甘汞电极为参比电极，铂电极为辅助电极。

所述电极为工作电极，用于疫苗注射前血液中维生素K1含量的检测，应用于预防 疫苗注射后由于维生素K缺乏所导致的耦合性出血症。