[发明专利]枯草芽孢杆菌及其在防治玉米小斑病方面的应用

权利要求书

1.一种防治玉米小斑病的枯草芽孢杆菌菌株，其特征在于：该菌株为DZSY21；保藏名称为枯草芽孢杆菌；保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2015年11月27日；保藏编号:CGMCCNO.11749。

2.根据权利要求1所述的防治玉米小斑病的枯草芽孢杆菌菌株，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌的16S rDNA基因序列为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，所述枯草芽孢杆菌的gyrB基因序列为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；

所述芽孢杆菌菌株的单菌落在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上为圆形，暗白色，不透明，边缘整齐，表面粗糙有褶皱，在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，35-37℃培养18-24h后，镜检，菌体细胞呈短杆状，能运动；经革兰氏染色呈紫色，为阳性。

3.权利要求1所述的防治玉米小斑病的枯草芽孢杆菌菌株制备的枯草芽孢杆菌菌剂。

4.根据权利要求3所述的枯草芽孢杆菌菌剂，其活性成分为如下(a)：

(a)权利要求1所述的枯草芽孢杆菌的发酵培养物。

5.权利要求3所述枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)枯草芽孢杆菌种子液制备：将枯草芽孢杆菌DZSY21接种于培养液中，将培养液50mL置于250mL三角锥形瓶中，搅拌速率为160r/min，于35-37℃培养12-16小时，至培养液OD₆₀₀为0.8-1.0，获得种子液；

(2)发酵菌剂制备：将上述枯草芽孢杆菌DZSY21种子液接种于发酵液体培养基中，1L三角锥形瓶装发酵液体培养基350mL，所述种子液的接种量为1.5％-2.5％，搅拌速率为160r/min，于35-37℃培养8-10小时，调节发酵液中枯草芽孢杆菌DZSY21的菌体浓度至1.0×10⁶-10⁷CFU/mL，获得枯草芽孢杆菌菌剂。

6.根据权利要求5所述的枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法，其特征在于：在步骤(1)中，所述培养液为：10g蛋白胨、5g酵母提取物、5g氯化钠、蒸馏水1L，pH 7.2；

在步骤(2)中，所述发酵液体培养基配方为：20g葡萄糖，5g L-谷氨酸，0.5g硫酸镁，0.5g氯化钾，1g磷酸二氢钾，0.15mg六水硫酸亚铁，5.0mg一水合硫酸锰，0.16mg五水硫酸铜，1L蒸馏水，pH 7.0。

7.权利要求2所述的枯草芽孢杆菌DZSY21在生产用于防治玉米小斑病的产品中的应用。

8.权利要求3所述的枯草芽孢杆菌菌剂在生产用于防治玉米小斑病的产品中的应用。

9.根据权利要求7或8所述的应用，所述玉米小斑病是由玉蜀黍平脐蠕孢Bipolarismaydis引起的。

10.权利要求3或4所述的枯草芽孢杆菌菌剂的使用方法，其特征在于：每片健康玉米叶片上喷洒枯草芽孢杆菌菌剂，所述菌剂的含菌量为1.0×10⁶CFU/mL，体积为5mL。