[发明专利]一种适用流式细胞术进行小麦根尖细胞周期分析的方法

权利要求书

1.一种适用流式细胞术进行小麦根尖细胞周期分析的方法，它是利用固定好的小麦根尖样品，制备小麦根尖组织的单细胞悬浮液，进行荧光染色，流式细胞仪检测，包括：

（1）小麦种子进行浸种催芽，待根长长至3-5cm时，切取约0.2cm长度的根尖，固定于新鲜配制的卡诺氏固定液中30min，用pH7-8的磷酸缓冲液漂洗干净后再转入体积比为70％的乙醇中，保存于4℃冰箱；所述的卡诺氏固定液指的是：甲醇:冰乙酸的体积比为3:l；其特征在于：

（2）将固定好的根尖样品置入0.1－0.2％（v/v）的甘油中渗透2-3h，用pH7-8的磷酸缓冲液漂洗3次，每次10min，静置沉淀后用移液枪吸取上层缓冲液，再浸没于纤维素酶和果胶酶制成的混合酶液中，37℃酶解1.5-3h，使小麦根尖组织松软；所述的纤维素酶和果胶酶的质量浓度皆为2%，用去离子水配制；

（3）将所述步骤2）中的小麦根尖用pH7-8的磷酸缓冲液漂洗3次，每次10min，用移液枪吸取大部分上层缓冲液后，用研棒温和研磨成单细胞悬液，过滤，收集滤液，即可获得单细胞悬液；

（4）单细胞悬液经3000r.p.m.离心4min，获取的沉淀加入浓度为0.5-2μg/ml的4，6-联脒-2-苯基吲哚染液，摇匀后避光染色10min，细胞内DNA物质被荧光染色，用pH7-8的磷酸缓冲液漂洗3次，每次10min；

（5）染色后单细胞悬液用流式细胞仪进行检测，激发光波长为340nm。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（1）中所述小麦种子用自来水进行浸种催芽，25℃孵育4-5d，待根长长至3-5cm。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（1）-（5）中用pH7-8的磷酸缓冲液每次漂洗后，均用3000r.p.m.转速离心4min。

4.权利要求1所述适用流式细胞术进行小麦根尖细胞周期分析的方法在了解细胞的增殖情况方面的应用。