[发明专利]一种荷叶总生物碱对植物病原真菌抑制活性方法及应用

权利要求书

1.一种荷叶总生物碱对植物病原真菌抑制活性方法，其特征在 于，所述荷叶总生物碱对植物病原真菌抑制活性方法包括：

孢子悬液的制备：将保存菌种接入马铃薯固体培养基的试管斜面 活化，取一支生长4d的试管斜面，用50mL的0.9％的无菌生理盐水 倒入试管中，用无菌的玻棒在斜面上搅动，将孢子刮下来，并用两层 纱布过滤，装入三角瓶中，用血球板计数法和平皿计数法测定其生长 浊度，将孢子悬液稀释；

经微波辅助热回流法提取、D－101型大孔吸附树脂纯化、冷 冻干燥得到，其中荷叶碱含量为1.37％，取荷叶总生物碱固体适量， 溶解，配置总生物碱溶液，调节pH，将溶液用微量小滤器过滤除菌 后用于体外抑菌试验；

采用管碟法，待培养基冷却到50℃时，加入2mL孢子悬液，摇 匀，倒入直径为12cm培养皿中，待凝固后，将牛津杯放置平皿菌层 上，每杯加入荷叶总生物碱，观察抑菌圈的大小；

采用试管倍比稀释法，分别用50％乙醇溶液置备荷叶总生物碱， 分别吸取以上浓度的荷叶总生物碱1mL加入到19mL液体培养基中， 再加入0.2mL孢子悬液，30℃培养48h，从试管中吸取0.2mL的培养 液，加入固体培养基中，涂布均匀，倒置放入30℃的恒温培养箱中， 培养48h，观察，未长菌平皿的最高稀释浓度为荷叶总生物碱最低杀 菌浓度；

采用平皿倍比稀释法，培养皿中加入19.0mL培养基，待培养基 还未凝固时，分别在各个培养皿中加入浓度为10mg/mL、5mg/mL、 2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL、0.312mg/mL、0.16mg/mL 荷叶总生物碱溶液1.0mL，摇匀，同时以50％乙醇为对照，待培养凝 固后，向各平皿中加入0.2mL孢子悬液，涂布均匀，30℃倒置培养 48h，观察，未长菌平皿的最高稀释浓度为荷叶总生物碱的最低抑菌 浓度。

2.如权利要求1所述的荷叶总生物碱对植物病原真菌抑制活性 方法，其特征在于，所述用血球板计数法和平皿计数法测定其生长浊 度，将孢子悬液稀释到10⁵～10⁶cuf.·mL^-1。

3.如权利要求1所述的荷叶总生物碱对植物病原真菌抑制活性 方法，其特征在于，所述取荷叶总生物碱固体适量，用50％乙醇溶解， 配置成10mg/mL和50mg/mL总生物碱溶液，调节pH为8。

4.如权利要求1所述的荷叶总生物碱对植物病原真菌抑制活性 方法，其特征在于，所述每杯分别加入2mg/mL、4mg/mL、10mg/mL 荷叶总生物碱0.25mL，30℃恒温培养48h，观察抑菌圈的大小，抑菌 圈的评判标准为：d≤8mm为不敏感型，8mm＜d≤13mm为低度敏感 型,13mm＜d≤19mm为中度敏感型，d＞19mm为高度敏感型。

5.如权利要求1所述的荷叶总生物碱对植物病原真菌抑制活性 方法，其特征在于，所述采用试管倍比稀释法，分别用50％乙醇溶液 置备10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL、 0.32mg/mL、0.16mg/mL荷叶总生物碱。

6.一种如权利要求1-5任意一项荷叶总生物碱对植物病原真菌 抑制活性方法的稻瘟病菌抑菌活性应用。

7.一种如权利要求1-5任意一项荷叶总生物碱对植物病原真菌 抑制活性方法的黄瓜枯萎病菌抑菌活性应用，最低抑菌浓度和最低杀 菌浓度均为160μg/mL。

8.一种如权利要求1-5任意一项荷叶总生物碱对植物病原真菌 抑制活性方法的油菜菌核菌抑菌活性应用。

9.一种如权利要求1-5任意一项荷叶总生物碱对植物病原真菌 抑制活性方法的红菇根霉菌抑菌活性应用。

10.一种如权利要求1-5任意一项荷叶总生物碱对植物病原真菌 抑制活性方法的小麦赤霉菌抑菌活性应用。