[发明专利]一种降钙素原单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种降钙素原单克隆抗体及其应用，该抗体由保藏编号为CGMCC NO：12035的杂交瘤细胞分泌产生。本发明提供的降钙素原单克隆抗体有方向性的识别降钙素原不同抗原表位区域。实验表明：本发明提供的降钙素原单克隆抗体可与降钙素原高度特异性的结合，且灵敏度高、稳定性好，用本发明提供的降钙素原抗体制备的检测试剂可以精确地测定血清中的降钙素原，具有高灵敏度和准确性，与市场上在售试剂检测结果具有高度相关性，与临床诊断具有较高的诊断一致性，可用于临床上对脓毒症或细菌性感染的辅助诊断。

技术领域

本发明涉及一种降钙素原单克隆抗体，具体涉及降钙素原单克隆抗体、降钙素原免疫原的制备及其应用，属于生物技术领域。本发明降钙素原单克隆抗体为由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的、编号为CGMCC NO：12035的杂交瘤细胞分泌产生；保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，电话：010-64807355，传真：010-64807288，电子邮件：cgmcc@im.ac.cn；保藏日期为：2016年01月28日。

背景技术

PCT(降钙素原)是一种无激素活性的降钙素前肽物质，是由位于11号染色体上的Calc-I基因编码产生。PCT由116个氨基酸组成，相对分子量为13000，可在特殊的蛋白酶作用下被分解成3部分，分别为氨基末端的57个氨基酸多肽的降钙素，位于中央区域的33个氨基酸多肽的降钙素和羧基末端21个氨基酸多肽的抗钙素。

正常情况下，PCT是由甲状腺C细胞和肝脏细胞产生，健康人体血清中PCT的含量很低(<0.1ng/ml)，几乎检测不到。当机体受到非甲状腺损伤，如烧伤、败血症、急性细菌感染等，血清中PCT浓度大量上升，而CT含量略有升高。说明除甲状腺C细胞能分泌PCT外，其它细胞也具有能分泌PCT的功能，只是这种功能须在一定条件下才能被诱发。有研究显示，在机体全身细菌感染1-3h开始升高，6h后PCT水平会急剧上升，12-48h上升至最高，2-3天后基本恢复正常，且它在6-24h内不会降解为降钙素，维持一定的稳定水平，在体内的半衰期大约为25～30h(Tavares E,FJ.Immunoneutralization of the aminoprocalcitoninpeptide of procalcitonin protects rats from lethal endotoxaemia:neuroendocrine and systemic studies[J].Clin Sci.,2010Dec；119(12):519-34.)。

PCT是区别细菌感染和非细菌性感染的重要指标，许多研究发现，在全身细菌、真菌感染时，血清PCT浓度会升高，而在非细菌性(如病毒)感染或是局部炎症反应时保持低水平。其它一些炎症指标如CRP和白细胞数目是炎症反应的标志物，对病毒感染或是细菌感染都有反应。后期研究表明，血清PCT浓度与脓毒症的严重程度呈正相关。健康人血清中PCT含量非常低，局部的细菌感染也只能使PCT水平微量升高，当PCT浓度>2.0ng/mL，并随着PCT浓度的升高，患者确诊为脓毒症的可能性也不断升高。因此，PCT与常规用于炎症诊断的指标相比，是较理想的诊断细菌性感染及脓毒性并发 症的一项指标。

临床实验室检测血清降钙素原常用的检测方法，如胶体金标记技术、双抗体夹心免疫化学发光法、胶乳增强免疫比浊法等，其检测试剂盒的研发对所需的单克隆抗体有一定要求，需要两种或两种以上的单克隆抗体，且必须能够识别不同抗原表位，以排除交叉反应、提高反应灵敏度。如果用PCT全抗原直接进行小鼠免疫，最后筛选出的能稳定分泌PCT单克隆抗体的细胞株，很可能是由抗原上免疫原性较强的同一位点刺激机体产生，或是只能识别降钙素或抗钙素，致使最终得到的单克隆抗体不能进行后续应用，导致有效抗体制备时间的延长，人力、财力资源的浪费。所以，我们需要设计一种免疫原，这种免疫原刺激机体产生的抗体针对不同的抗原区域，使制备的抗降钙素原抗体可以快速、有效的应用于特定降钙素原检测试剂盒的研制中。

发明内容