[发明专利]一种D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶dacA基因及应用在审
| 申请号： | 201610123620.3 | 申请日： | 2016-03-04 |
| 公开（公告）号： | CN105647892A | 公开（公告）日： | 2016-06-08 |
| 发明（设计）人： | 许菲;杨海泉;胡金远;强书敏;沈微;陈献忠;郑虹宁;宁璐璐 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/48 | 分类号： | C12N9/48;C12N15/57;C12N15/70 |
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| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 丙氨酰 丙氨酸 羧肽酶 daca 基因 应用 | ||
技术领域
发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶dacA及其基因和应用。
背景技术
肽聚糖是由双糖单位，四肽尾还有肽桥聚合而成得多层网状大分子结构。肽聚糖层的骨架由N-乙酰葡 萄糖胺和N-乙酰胞壁酸通过β-1，4糖苷键连接而成，糖链间由肽链交联，构成稳定的网状结构，这样构成了 整个细菌表面的细胞壁。作为细胞壁的主要成分，肽聚糖的组成与细胞结构的完整性、外膜的通透性的维 持、细菌的抗干燥能力和耐热性等均密切相关。dacA基因表达的D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶能够从肽聚糖 五肽上移除最后一个末端D-Ala，导致转肽反应中供体不可用，可以控制肽聚糖的网状交联水平，从而改 变细胞的通透性。
大肠杆菌(Escherichiacoli)表达系统是目前基因工程中最常用的蛋白表达系统，有操作简单、成本 低廉等优点，可以快速大规模地生产目的蛋白。但是在E.coli的表达过程中，大部分蛋白在信号肽的引导 下分泌到周质空间，会导致中间体大量积聚，对蛋白质的生产造成阻碍。
发明内容
本发明的目的是提供一种可以提高E.coli胞外分泌水平的D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶、其氨基酸序列、 编码该D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶的基因、含有该基因的重组质粒、含有该重组载体的重组菌株、该D-丙 氨酰-D-丙氨酸羧肽酶的应用。
具体包括：
本发明提供了一种D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶dacA，其氨基酸序列如序列1所示。
序列1：
MNTIFSARIMKRLALTTALCTAFISAAHADDLNIKTMIPGVPQIDAESYILIDYNSGKVLAEQNADVR RDPASLTKMMTSYVIGQAMKAGKFKETDLVTIGNDAWATGNPVFKGSSLMFLKPGMQVPVSQLIRGINL QSGNDACVAMADFAAGSQDAFVGLMNSYVNALGLKNTHFQTVHGLDADGQYSSARDMALIGQALIRD VPNEYSIYKEKEFTFNGIRQLNRNGLLWDNSLNVDGIKTGHTDKAGYNLVASATEGQMRLISAVMGGRTF KGREAESKKLLTWGFRFFETVNPLKVGKEFASEPVWFGDSDRASLGVDKDVYLTIPRGRMKDLKASYVL NSSELHAPLQKNQVVGTINFQLDGKTIEQRPLVVLQEIPEGNFFGKIIDYIKLMFHHWFG
其中，该酶基因编码403个氨基酸，其理论分子量为44.45kDa。
本发明提供了编码上述D-丙氨酰-D-丙氨酸羧肽酶的基因dacA，具体的，该酶的基因序列如序列2所示。
序列2：
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