[发明专利]一种基因组DNA提取方法

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种基因组DNA提取方法。

技术背景

DNA提取是基因克隆研究的第一步，现有的方法主要是CTAB方法，其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫氰酸胍法、碱裂解法。生物方式：酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有；硅质材料、阴离子交换树脂等。这些方法种类繁多，提取质量各有千秋，还不能完全满足使用需求。

发明内容

发名目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种基因组DNA提取方法，具有高效，快速质量高等优点。

技术方案：为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种基因组DNA提取方法，包括以下步骤：

1）取新鲜材料剪碎，加液氮速冻，快速研磨，获得低温粉料；

2）将低温粉料转移到1.5mL 离心管中，加20%SDS 20mL，蛋白酶K（2mg/mL）20mL，混匀；

3）55℃水浴2-3h；

4）加等体积饱和酚至上述样品处理液中，温和、充分混匀4min；

5）离心5500g 12min，取上层水相到另一1.5mL 离心管中；

6）加等体积饱和酚，混匀，离心5300g 12min，取上层水相到另一管中；

7）加等体积酚/氯仿，轻轻混匀，离心5500g 12min，取上层水相到另一管中；如水相仍不澄清，可重复此步骤数次；

8）加等体积氯仿，轻轻混匀，离心5500g 12min，取上层水相到另一管中；

9）加1/10体积的3M醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积的无水乙醇，轻轻倒置混匀；

10）待絮状物出现后，离心5500g 6min，弃上清液；

11）沉淀用75%乙醇洗涤，离心5500g 2min，弃上清液；

12）室温下挥发乙醇，待沉淀将近透明后加50-100mLTE溶解过夜；

13）取1uL DNA溶解液检测DNA质量；

14）DNA质量符合要求后，将DNA溶解分装到1.5mL离心管冷冻保藏。；

所述的TE：10mM Tris-HCl，1mM EDTA。

所述的TBS：25mM Tris-HCl，200mM NaCl，5mM KCl。

所述裂解缓冲液：250mM SDS，使用前加入蛋白酶K至100mg/mL。

有益效果：与现有技术相比，本发明热的DNA提取方法，在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中快速高效的获得DNA，DNA质量高，经酶切后不仅可用于Southern分析，还可用于PCR的模板、文库构建等后续研究，具有很好的实用性。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。

以下实施例所使用的主要试剂如下：

TE：10mM Tris-HCl（pH7.8），1mMEDTA（pH8.0）。

TBS：25mMTris-HCl（pH7.4），200mMNaCl，5mMKCl。

裂解缓冲液：250mM SDS，使用前加入蛋白酶K至100mg/mL。

20%SDS、2mg/mL 蛋白酶K、Tris饱和酚（pH8.0）、酚/氯仿（酚∶氯仿=1∶1）、氯仿、无水乙醇、75%乙醇。

实施例1

一种基因组DNA提取方法，包括以下步骤：

1）取新鲜材料剪碎，加液氮速冻，快速研磨，获得低温粉料。

2）将低温粉料转移到1.5mL 离心管中，加20%SDS 20mL，蛋白酶K（2mg/mL）20mL，混匀。

3）55℃水浴2-3h。

4）加等体积饱和酚至上述样品处理液中，温和、充分混匀4min；

5）离心5500g 12min，取上层水相到另一1.5mL 离心管中。

6）加等体积饱和酚，混匀，离心5300g 12min，取上层水相到另一管中。

7）加等体积酚/氯仿，轻轻混匀，离心5500g 12min，取上层水相到另一管中。如水相仍不澄清，可重复此步骤数次。

8）加等体积氯仿，轻轻混匀，离心5500g 12min，取上层水相到另一管中。

9）加1/10体积的3M醋酸钠（pH5.2）和2.5倍体积的无水乙醇，轻轻倒置混匀。

10）待絮状物出现后，离心5500g 6min，弃上清液。