[发明专利]植物系统性侵染病害药物的筛选方法

说明书

本发明公开了一种植物系统性侵染病害药物的筛选方法，该方法可针对植株进行系统性施药，解决系统性病害施药困难的问题。本发明包括植株的培育、传病、药物施用和筛选。本发明以系统感染细菌性病害或病毒性病害的草本寄主为试材，给药方法简便易行，可使药物实现系统扩散，能直观反映和正确评价药物抑制病原物的效果，对系统性病害药物筛选和应用具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种药物筛选的方法，具体涉及一种植物系统性侵染病害药物的筛选方法。属于植物保护生物测定技术领域。

背景技术

植物系统性侵染病害是指侵染植物的整个生命系统和维管束组织的病害，这类病害在植物中广泛存在，病原物存活于寄主植株体内，该类病害局部侵染系统传播，遍及全株。引起该类病害的病原主要有细菌、病毒和类病毒。其中种类最多的主要是病毒性病害，细菌性病害大多是尚不能体外人工培养的，危害最重的当属由韧皮部杆菌侵染引起的柑橘黄龙病和马铃薯斑马纹病及由植原体侵染引起的枣疯病和丛枝病等。不论是细菌还是病毒或类病毒侵染引起的系统性病害目前均缺乏可供使用的防治药物。造成药物研发缓慢的最主要限制因素是病原物未暴露在植株体外且不可人工培养，常规药物采用喷施法无法穿透植物细胞抵达病灶杀死或抑制病原物增殖，严重制约了相关病害的防治。

为了缩短药物筛选周期，对木本植物进行药效的生物测定通常先选用草本寄主进行实验，以提高筛选效率。如筛选防治韧皮部杆菌和植原体的药物通常选用长春花进行初步筛选，一些病毒性病害常选用草本寄主茄科植物或豆科植物进行筛选。目前，系统性侵染病害给药的方法通常采用离体组织浸泡药物后进行扦插或嫁接，存活后观察发病情况并检测病原物含量，离体浸药的弊端是不能实现活体系统给药，扦插评测药效的周期较长，扦插苗长势没有实生苗好，存活率较低，且不利于以后田间药物的施用，用药前后的对比也不够直观。

系统性病害施药困难，目前尚不能实现针对植株的系统性施药，现阶段急需一种简单高效的给药方法，使药物实现系统扩散，这样既可以快速完成生物测定，又可以直观看出施用效果，从而正确评价药物抑制病原物的效果，对系统性病害药物筛选和应用具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种植物系统性侵染病害药物的筛选方法，其通过叶柄或枝条给药从而进行药物筛选。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

植物系统性侵染病害药物的筛选方法，步骤如下：

(1)草本寄主的培育和传病：播种草本寄主植物，待其幼苗高度生长至20～30cm，接种病害，注意观察直至病害症状开始表现，得到感病植株；

(2)微型输液器准备：将注射器去除针头和活塞后作为微型输液器的注射针筒，安装针头的接口部分朝下，将注射针筒竖直放置在比感病植株高的位置，注射针筒的针头接口处紧套一硅胶管，作为微型输液器的输液管；之后选一片成熟的叶片，切去叶片留下叶柄，并将叶柄插入硅胶管的另一端，密封硅胶管与叶柄的连接处；

(3)药物施用：将所选药物溶液加入注射针筒中，用封口膜密封注射针筒顶端开口处，并在封口膜上扎若干个孔，以防感病植株吸收药物溶液时产生真空影响药物施用效果，用一个带针头的注射器在靠近叶柄切口处扎孔抽除输液管内的空气，使得药物溶液流至叶柄切口处，拔掉针头，立即用密封胶封堵扎出的针孔，药物溶液持续处理3～5天后移除；

(4)抗病药物筛选：2～3个月后观察症状，通过实时荧光定量PCR检测植株体内病原物的含量，进而分析所用药物的效果。

步骤(1)中，接种病害的方法为菟丝子传毒，植物汁液摩擦或传病昆虫介体接种。