[发明专利]一种预混合饲料中维生素A的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及维生素A测定技术领域，具体涉及一种复合预混合饲料中维生素A的测定方法。

背景技术

关于饲料中维生素A的测定，现在最常用的也是最为准确的是GB/T17817-2010公开的皂化提取法，其具体包括皂化、提取、浓缩和测定四个步骤。虽然上述方法可以准确的测出饲料中所含维生素A的具体含量，但是上述方法包含上述四个步骤，且皂化和提取两个步骤操作繁琐，不适用于饲养企业或者饲料生产企业检测室快速、及时检测；为了能够在饲养企业或者饲料生产企业检测室快速、及时的检测出维生素A，GB/T 17817-2010还公开了一种比较简单的检测方法，其被称为直接提取法，具体包括标准溶液的制备、试样溶液的制备以及使用高效液相色谱仪进行检测的步骤，其中，关于试样溶液的制备步骤具体如下：称取试样1g，精确至0.0001g，置于100mL的棕色容量瓶中，加入约80mL的甲醇，瓶塞不要拧紧，于65℃超声波水浴中超声提取30min，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，充分摇匀即可。虽然，上述试样溶液的制备步骤比较简单，非常适合饲养企业或者饲料生产企业快速及时检测维生素A的目的，但是，由于维生素A是脂溶性的维生素，本身对热度非常敏感，尤其是超声温度已经超过了60℃，这样在超声提取的步骤中就会发生部分降解，使得最终检测的维生素A的含量发生偏移，使得人们对饲料中关于维生素A的含量的判断不正确，并且，在维生素A含量少时的相对偏差较大，在20％左右；同时，由于在超声提取过程的使用的有机溶剂是甲醇，由于甲醇本身具有毒性且挥发性非常大，使得操作不方便且容易发生事故。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于现有技术中，由于在超声提取饲料中维生素A的过程温度偏高，导致最终检测饲料结果中维生素A含量偏低的问题。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种复合预混合饲料中维生素A的测定方法，其包括：

(1)称取1-10g复合预混合饲料作为试样，精确至0.0001g；

(2)将上述试样置于棕色容量瓶中，加入约80mL维生素A混合溶剂，瓶塞不要塞紧，于10-35℃超声波水浴中超声提取10-20min，接着使用维生素A混合溶剂稀释至刻度，充分摇匀得到维生素A溶解液；其中，所述维生素A混合溶剂为包括体积比为(98-99)：(0.8-1.5)：(0.2-0.5)的甲醇、正己烷和BHT形成的混合溶剂；其中，BHT为抗氧化剂，其化学名称为2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚，它以对甲酚、异丁醇为原料，以浓硫酸作为催化剂，氧化铝为脱水剂，反应生成2.6-二叔丁基对甲酚。

(3)使用高效液相色谱仪对上述维生素A溶解液进行测定。

其中，步骤(2)中超声波水浴的超声波频率为15-40KHZ。

进一步，步骤(2)中超声波水浴的超声波频率设置为梯度设置，所述梯度设置为超声波频率随着超声提取时间均匀增加。

在步骤(3)中，高效液相色谱仪的色谱条件如下：

色谱柱：C18型柱，长150mm，内径4.6mm，粒度5μm；

流动相：混合比例为体积比80-98：2-20的甲醇与水的混合液，其中甲醇与水都需要经过0.45μm的过滤膜，按比例配好后超声波超声15min；

流速：1.0mL/min；

温度：室温；

进样量：20μl；

检测波长：326nm。

进一步，所述测定方法还包括标准溶液的制备，包括：

称取维生素A乙酸酯标准品(精确至0.0001g)于棕色容量瓶中，用所述维生素A混合溶剂溶解并稀释至刻度，混匀，4℃保存。

优选地，在步骤(2)中，关于维生素A混合溶剂的制备方法是通过将一定体积比的甲醇、正己烷和BHT通过超声波超声混合均匀。

本发明的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：