[发明专利]一种用于检测华法林用药相关基因分型的引物探针组合及试剂盒

说明书

本发明属于生物技术领域，涉及华法林用药指导基因检测的引物探针组合及试剂盒。本发明提供了用于检测华法林用药相关基因分型的引物，引物序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示；还提供了用于检测华法林用药相关基因分型的探针，探针序列如SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.12所示。本发明的有益效果在于通过华法林用药指导基因检测试剂盒的研制和应用，可以使得CYP2C9*3、CYP4F2、VKORC1这3个基因分型更加方便易行，同时保证无创诊断，为临床医生快速准确掌握患者遗传情况，大大降低用药剂量不合适而引起的医疗事故发生率，减轻用药副作用，为提高临床治疗效果奠定基础；检测速度快，每份样品检测仅需耗时约2小时。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及华法林用药指导基因检测的引物探针组合及试剂盒。

背景技术

华法林是临床常用的一种适用于预防和治疗血栓栓塞性疾病的药物，是香豆素类抗凝剂的一种，在体内有对抗维生素K的作用。华法林可以抑制维生素K参与的凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的在肝脏的合成，起效后作用和维持时间较长。主要用于防治血栓栓塞性疾病。华法林的剂量反应(国际标准化比值)关系变异很大，受许多因素的影响，一旦过量会导致出血，因此需要严密监测。

华法林的量效关系受遗传因素及环境因素的影响。遗传因素主要包括细胞色素P450基因位点的突变，肝酶对华法林S型异构体氧化代谢的活力。基因多态性已经被认为与小剂量华法林引起较高的出血并发症的发生率相关。因此，在临床上对患者使用华法林的剂量作出判断时，明确其基因多态性对制订治疗方案、分析预后非常重要。

目前检测华法林用药相关基因遗传多态性的最简单的方法是PCR-RFLP，其主要原理是通过应用特异性限制性内切酶消化PCR扩增产物，并根据消化位点是否消失来判断其变异存在与否。但该方法操作复杂，样本量多时易造成PCR产物的交叉污染且容易出现酶切不充分或酶切过度而出现假阴性或假阳性结果，可靠性低。荧光定量PCR和多重PCR方法尽管特异性有所提高，但是这两种方法的原理仍然是基于普通PCR的原理，荧光信号的强弱，引物特异性以及低保真Taq酶等这些因素均可造成对结果的影响。DNA测序法价格相对昂贵且操作流程繁琐，在人类后基因组时代突飞猛进的今天，这几种方法均不能满足当前对华法林用药相关基因遗传多态性快速准确分析的要求。因此，目前研发一种用于检测华法林代谢相关基因的检测试剂盒十分迫切。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种用于检测华法林用药相关基因分型的引物探针组合及试剂盒。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：一种用于检测华法林用药相关基因分型的引物，所述引物为如下列序列所示的引物对：

在本发明的第二方面，提供了一种用于检测华法林用药相关基因分型的探针，所述探针为如下列序列所示的探针：

在本发明的第三方面，提供了前述引物和探针在制备检测CYP2C9*3、VKORC1和CYP4F2多态性位点的试剂盒中的应用。

在本发明的第四方面，提供了一种用于检测华法林用药相关基因分型的试剂盒，其特征在于包括前述引物和探针；优选的，所述引物和探针用量为0.5μl。所述基因检测试剂盒还可以包括PCR反应常用试剂，如Taq酶，逆转录酶，缓冲液，dNTPs，MgCl₂和DEPC水等；还可以含有标准品和/或对照品。

在本发明的第五方面，提供了前述试剂盒在检测CYP2C9*3、VKORC1和CYP4F2多态性位点中的应用。

术语“rs9923231、rs2108622”等，均是人SNP位点在NCBI数据库的统一编号；CYP2C9*3等是对CYP2C9基因上一系列多态位点的另一种命名体系，如CYP2C9*3对应rs1057910位点。