[发明专利]一种速生白榆的组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，特别涉及一种速生白榆的组培快繁方法。

背景技术

白榆(Ulmus pumila)为榆科榆属植物，根系发达，适应性强，耐寒耐旱，耐中度盐碱，可作滨海盐碱地造林和绿化树种，速生白榆在实际应用中优势明显，但传统的扦插无性繁殖法成活率低、扩繁周期长，致使其扩繁和推广受到影响。

目前国内针对白榆的研究主要以资源保存、杂交育种、实生苗选育、非常规育种为主，将细胞和组织培养用于白榆遗传改良的较少，目前公开的白榆组织培养中，外植体以茎段诱导效果较好，叶片分化效果不佳，培养基以MS最常用，激素以6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）为主，辅以吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、噻苯隆（TDZ）等，王静华等（2009）以白榆茎段和叶片为外植体进行白榆再生研究，茎段再生效果较好，最适增值培养基为MS + 6-BA 0.10 mg/L+IBA 0.005mg/L，增值系数为243%，平均茎高2.65cm。最适生根培养基为：MS +IBA 0.01mg/L，生根率100%，生根系数8.94，但主根较少。现有专利中，辛全伟等（2012）公布了一种耐盐白榆的继代和生根配方；慕德宇等（2014）公布了一种耐盐速生白榆继代培养基EM及激素配比；林大为等（2014）公布了一种白榆组培苗复壮的方法，以上研究集中在基本培养基研发、继代、壮苗、生根等一个或两个环节且缺少炼苗过程，鲜有完整白榆再生体系，无法很好的指导生产。

发明内容

为了解决以上现有技术中白榆组织培养方法不系统、无法很好的指导生产的问题，本发明提供了一种完整的速生白榆的组培快繁方法。

本发明是通过以下步骤得到的：

本发明所述速生白榆的组培快繁方法，由无菌外植体的获得，丛生芽诱导，组培苗复壮，生根培养和炼苗步骤组成。

其中：所述无菌外植体获得：5-6月份采取新生嫩枝和嫩芽为外植体，用饱和洗洁净水浸泡5~10min，后用毛笔轻刷表面，再用流水冲洗30~60min；移至超净工作台，用70~75%酒精消毒20~30s，无菌水冲洗2~3次，再用1%次氯酸钠溶液消毒8~10min，后用无菌水冲洗5~8次，每次不少于3min，最后再置于少量无菌水中，防止接种时间过长造成外植体缺水失活。接种时，用无菌滤纸吸去外植体表面多余水分，获得无菌外植体。

其中：所述丛生芽诱导的方法是：将灭菌后的外植体剪成1cm左右带腋芽小段接种于快繁培养基上，在25±2℃，光照14~16h，光强3000lx条件下培养20~30天，获得丛生芽；其中所述快繁培养基的组成为：DKW + TDZ 0.075~0.2 mg/L + 6-BA 0.025~0.075 mg/L+ IBA 0.025~0.075 mg/L + NAA 0~0.1 mg/L+蔗糖20~30g/L+琼脂6.5g/L+AC 0.5g/L，pH值为5.8~6.0；其中DKW培养基组分为：硝酸铵1416.0mg/L，硼酸4.8mg/L，无水氯化钙112.5mg/L，硝酸钙1367.0mg/L，五水硫酸铜0.25mg/L，乙二胺四乙酸二钠45.4mg/L，七水硫酸铁33.8mg/L，硫酸镁361.49mg/L，一水硫酸锰33.5mg/L，钼酸钠0.39mg/L，六水硫酸镍0.005mg/L，磷酸二氢钾265.0mg/L，硫酸钾1559.0mg/L，六水硝酸锌17.0mg/L，盐酸硫胺素5.22mg/L。

其中：优选快繁培养基为： DKW + TDZ 0.1-0.2 mg/L + 6-BA 0.025-0.05 mg/L+ IBA 0.025-0.075mg/L + NAA0-0.1 mg/L+蔗糖25g/L+琼脂6.5g/L +AC 0.5g/L。

所述最适宜的快繁培养基为： DKW + TDZ 0.2 mg/L + 6-BA 0.05 mg/L+ IBA 0.025mg/L + NAA0.1 mg/L+蔗糖25g/L+琼脂6.5g/L +AC 0.5g/L。