[发明专利]一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法

说明书

本发明公开了一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法，包括以下步骤：步骤一、制备琼胶寡糖；步骤二、菌种培养：制备MRS培养基，琼胶寡糖作为碳源，接种保加利亚乳杆菌OD₆₀₀值为0.8的菌液，接种量为2％，无氧环境下，42℃，静置培养2‑3天；步骤三、液体菌保藏：在0D₆₀₀值为1.2保加利亚乳杆菌液体中，添加浓度为1‑10g/L且聚合度为3‑8的琼胶寡糖，4℃下贮藏；步骤四、固体菌剂保藏：在0D₆₀₀值为1.2保加利亚乳杆菌液体中，添加浓度为5g/L且聚合度为3的琼胶寡糖，喷雾干燥制备固体菌剂。本发明具有提高保加利亚乳杆菌液体和固态菌剂制备在保藏过程中活力的作用，可用于乳酸菌发酵企业及乳制品生产企业，以生产高活性乳酸菌制品以及高耐藏性的乳制品。

技术领域

本发明涉及菌种保藏的技术领域，尤其涉及一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法。

背景技术

江蓠(Gracilaria)是多年生的大型红藻,属于红藻门,是我国广东、浙江、台湾沿海藻类养殖品种之一，主要作为渔业养殖饲料和生产食品胶原料。江蓠菜琼胶寡糖是一种非消化性低聚糖，对保加利亚乳杆菌的生长具有明显促进作用，并且具有抑制病原菌、腐败菌等有害菌的生长，能提高人体免疫力，改善内分泌系统，促进营养物质的吸收，对人体亚健康状态进行改善，对抗生素、激素、细胞毒性药物等所致的菌群失调所引起的肠炎、腹泻、便秘以及药物的副作用进行治疗，具有延年益寿的作用。因此江蓠菜琼胶寡糖是一种新型保健品以及食品添加剂或饲料添加剂。

目前，在现有技术中还未有江蓠菜琼胶寡糖对益生菌的促进效果的报导，国内外主要研究寡糖的抗病毒、抗炎症、抗癌症等作用。工业生产益生菌发酵产品，往往出现产品益生菌数量不达标的问题。有鉴于此，本发明人研究和设计了一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法，本案由此产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法，利用江蓠菜琼胶寡糖作为保加利亚乳杆菌的碳源，保护保加利亚乳杆菌在低温贮藏下的活性，保护保加利亚乳杆菌在人体胃肠液中存活率，提高保加利亚乳杆菌的菌活力。

为了实现上述目的，本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：

一种琼胶寡糖作为保护剂保藏保加利亚乳杆菌的方法，包括以下步骤：

步骤一、制备琼胶寡糖：将江蓠清洗除杂，烘干，加入江蓠重量30倍的水使江蓠充分溶胀，置于80℃的水浴中加热2h；高压灭菌，121℃灭菌20min；将江蓠趁热挤胶，用滤布包裹江蓠，并利用压力机挤压，收集挤胶滤出的多糖溶液，冷却、烘干、粉碎成颗粒，即得江蓠粗多糖；将冷却的粗多糖溶解水中，制成浓度为5g/L的多糖溶液，加入琼胶酶处理；加酶量为15％(v/v)，酶活为300U/mL；酶解20-1280min，以制备寡糖溶液，冷冻干燥，或真空干燥成固体粉末，制得聚合度为3-8的琼胶寡糖；

步骤二、菌种培养：制备MRS培养基，琼胶寡糖作为碳源，接种保加利亚乳杆菌OD₆₀₀值为0.8的菌液，接种量为2％，无氧环境下，42℃，静置培养2-3天；

步骤三、液体菌保藏：在0D₆₀₀值为1.2保加利亚乳杆菌液体中，添加浓度为1-10g/L且聚合度为3-8的琼胶寡糖，放置4℃下贮藏；

步骤四、固体菌剂保藏：在0D₆₀₀值为1.2保加利亚乳杆菌液体中，添加浓度为5g/L且聚合度为3的琼胶寡糖，喷雾干燥制备固体菌剂，喷雾干燥条件为：麦芽糊精添加量25％，进风温度130℃，进风速度4m³/min，进料速度700mL/h，空气压力0.3Pa，制备固体菌剂，制备好的固体菌剂放置在常温或-20℃贮藏。

作为实施例的优选方式，所述步骤一中，酶解时间为20min，制得聚合度为8的琼胶寡糖。