[发明专利]DC诱导活化剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及组织工程领域，特别涉及一种DC诱导活化剂及其应用。

背景技术

细胞免疫治疗是一种新兴的、具有显著疗效的全新的抗肿瘤治疗方法， 弥补了传统的手术、放疗、化疗的弊端，已经被公认为二十一世纪肿瘤综合 治疗模式中最活跃、最有发展前途的一种治疗手段,也是世界目前唯一有希望 完全消灭肿瘤细胞的治疗手段。

细胞免疫治疗疗法是采集人体自身免疫细胞，经过体外培养，使其数量 成千倍增多，靶向性杀伤功能增强，然后再回输到人体来杀灭血液及组织中 的病原体、癌细胞、突变的细胞，打破免疫耐受，激活和增强机体的免疫能 力，兼顾治疗和保健的双重功效。目前在临床中使用最多的细胞免疫治疗疗 法主要是DC治疗、CIK治疗和DC-CIK联合免疫治疗。

DC是目前发现的功能最强大的抗原提呈细胞(antigenpresenting cell,APC)。近年来，以树突状细胞(dendriticcell,DC)为基础的肿瘤免疫治疗 及DC疫苗已取得较大进展，体外制备的DC疫苗显示出明显诱发抗肿瘤免 疫应答的能力，具有良好的临床应用前景。目前，从外周血单个核细胞(PBMC) 经GM-CSF、IL-4体外诱导培养DC的方法已基本得到公认，但DC体外 促成熟的方案尚没有统一的标准，国内主要采用TNF-a因子，但该方法活化 的DC成熟度低下，不能分泌促炎因子IL-12，致使培养得到的DC功能缺 陷，很大程度上限制了DC疫苗的临床应用工作的开展。因此，有必要对现 有DC细胞培养方案进行进一步完善，以有效提高DC疫苗在诱导抗炎或抗 肿瘤免疫应答中的作用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，针对现有技术培养出的树突状细胞体外 诱导成熟率低，细胞增殖率低，且抗原提呈性能差等缺陷，提供一种能够提 高树突状细胞成熟率及抗原提呈性能的DC诱导剂及其在诱导DC成熟过程中 的应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种DC诱导活化剂， 包括rhTNF-α和，没食子酸或核桃青皮提取物。

在本发明提供的DC诱导活化剂中，所述rhTNF-α的浓度为800～1200U /ml和，没食子酸的浓度为5～15μg/ml或所述核桃青皮提取物的浓度为 10～30μg/ml。

在本发明提供的DC诱导活化剂中，所述rhTNF-α的浓度为1000U/ml 和、没食子酸的浓度为10μg/ml或所述核桃青皮提取物的浓度为20μg/ml。

在本发明提供的DC诱导活化剂中，所述rhTNF-α的浓度为800U/ml 和、没食子酸的浓度为5μg/ml或所述核桃青皮提取物的浓度为10μg/ml。

在本发明提供的DC诱导活化剂中，所述rhTNF-α的浓度为1200U/ml 和、没食子酸的浓度为15μg/ml或所述核桃青皮提取物的浓度为30μg/ml。 本发明进一步提供上述的DC诱导剂在诱导DC成熟过程中的应用。

实施本发明提供的DC诱导活化剂及其应用，可以达到以下有益效果：与 现有树突状细胞诱导活化剂相比，本发明提供的DC诱导活化剂，能够促进提 高树突状细胞的细胞活性，提高树突状细胞的增值率及成熟率，进而提高树 突状细胞的抗原提呈性。

具体实施方式

本发明提供的DC诱导活化剂，包括rhTNF-α(Recombinanthumantumor necrosisfactor-α，重组人肿瘤坏死因子α)和没食子酸；其中，没食子酸可 由核桃青皮提取物来代替。

进一步地，rhTNF-α能够刺激树突状细胞成熟，以提高树突状细胞抗原 提呈能力；优选地，rhTNF-α的浓度为800～1200U/ml。而核桃青皮提取物 的主要成份包括没食子酸、甲醇、石油醚、氯仿、正丁醇等，核桃青皮提取 物和没食子酸对金黄色葡萄球菌等细菌均具有强抗菌作用，并且对真菌也有 明显抑制作用；另外，还能够清除自由基，具有较强的抗氧化活性，以提高 树突状细胞的细胞活性，促进其成熟和正常的生长增殖。优选地，没食子酸 的浓度为10μg/ml，或核桃青皮提取物的浓度为10～30μg/ml。

本发明提供的DC诱导活化剂，应用于DC成熟过程的方法，包括以下步 骤：

S1、获取树突状细胞前体单个核细胞；

S2、采用第一诱导剂将树突状前体细胞当个核细胞诱导分化成未成熟树 突状细胞；