[发明专利]树突状细胞的培养方法和树突状细胞

权利要求书

1.一种树突状细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

获取树突状细胞前体单个核细胞，经第一诱导剂培养4～7天，每隔2～3 天更换培养基，获得未成熟树突状细胞；

再添加第二诱导剂培养所述未成熟树突状细胞至树突状细胞成熟；

其中，第一诱导剂包括：rhGM-CSF和rhIL-4；

第二诱导剂包括rhTNF-α和番茄脂溶性提取物或番茄水溶性提取物。

2.根据权利要求1所述的树突状细胞的培养方法，其特征在于，所述第 一诱导剂中，rhGM-CSF的浓度为800～1200U/ml、和rhIL-4的浓度为 800～1200U/ml。

3.根据权利要求2所述的树突状细胞的培养方法，其特征在于，所述第 一诱导剂中，rhGM-CSF的浓度为1000U/ml和rhIL-4的浓度为1000U/ ml。

4.根据权利要求1所述的树突状细胞的培养方法，其特征在于，所述第 二诱导剂中，rhTNF-α的浓度为800～1200U/ml和番茄脂溶性提取物的浓度 为5～15μg/ml，或番茄水溶性提取物的浓度为5～15μg/ml。

5.根据权利要求4所述的树突状细胞的培养方法，其特征在于，所述第 二诱导剂中，rhTNF-α的浓度为1000U/ml和番茄脂溶性提取物的浓度为10 μg/ml，或番茄水溶性提取物的浓度为10μg/ml。

6.根据权利要求4所述的树突状细胞的培养方法，其特征在于，所述番 茄脂溶性提取物的提取方法，包括以下步骤：

避光条件下，取新鲜番茄处理成浆状后，干燥至粉末状；取番茄粉末加 入乙醇-正丁烷萃取液混匀，离心，收集上清液，向残留物中添加正丁烷混匀， 离心，再次收集上清液，然后将收集的上清液混合，用蒸馏水和NaCl溶液清 洗后，用氮气吹干即可。

7.根据权利要求4所述的树突状细胞的培养方法，其特征在于，所述番 茄水溶性提取物的提取方法，包括以下步骤：避光条件下，取新鲜番茄处理 成浆状后，干燥至粉末状；取番茄粉末，加入乙醇，加热至40～70℃、1～2小 时，冷却后离心；于相同条件下加热冷却离心并提取残渣两次，合并上清液， 过滤备用。

8.根据权利要求1所述的树突状细胞的培养方法，其特征在于，所述树 突状细胞前体单个核细胞的获取过程，包括以下步骤：

抽取外周静脉血，稀释，添加淋巴细胞分离液离心10～20分钟后，分离 获取外周血单个核细胞；用含有10％～15％的胎牛血清、50～150U/ml青霉素和 50～150U/ml链霉素的完全培养基悬浮细胞浓度至(2～6)×10⁶个/ml，孵育 1～3小时，更换新的完全培养基，收集细胞悬液，即为树突状细胞前体单个核 细胞悬液。

9.根据权利要求1所述的树突状细胞的培养方法，其特征在于，还包括 以下步骤：添加所述第一诱导剂之前，需调节所述树突状细胞前体单个核细 胞浓度为(1～3)×10⁶个/ml。

10.一种树突状细胞，其特征在于，是由权利要求1～9任一项所述的树 突状细胞的培养方法所获得的。