[发明专利]一种大苞水竹叶的组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物繁殖方法，特别是一种大苞水竹叶组织培养快速繁殖方法。

背景技术

大苞水竹叶,为鸭趾草科植物大苞水竹叶（Euphorbia pekinensis Rupr.），多年生常绿草本。根圆柱状，长20-30厘米。花期5-8月，果期6-9月。广布于全国（除台湾、云南、西藏和新疆），北方尤为普遍。生于山坡、灌丛、路旁、荒地、草丛、林缘和疏林内。根入药，具有较高的药用价值，约 100元/公斤，具有逐水通便，消肿散结，主治水肿，并有通经之效，用于治疗慢性肾炎，治疗晚期血吸虫病腹水或其他肝硬变腹水等症。近年来其资源遭到了严重破坏，且对生长环境要求苛刻，随着市场需求量的不断增加，野生大苞水竹叶资源濒临枯竭了，生产上难以实现大面积栽培。采用生物技术组织培养技术，可以有效快速地提高大苞水竹叶种苗的繁殖速度和质量，实现大苞水竹叶优质种苗的工厂化育苗，以满足生产上的需要。

发明内容

本发明的目的是提供一种大苞水竹叶组织培养快速繁殖方法，它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良大苞水竹叶种苗。

本发明通过以下技术方案达到上述目的：一种大苞水竹叶组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

（1）外植体的选择与消毒：取大苞水竹叶顶芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5~10min、线状自来水冲洗5~15min、75% 乙醇中表面消毒30~45 s、添加了2-3滴吐温-20的0.1% Hgcl₂消毒8~10min、无菌水冲洗3~5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；

（2）顶芽分化获得丛生芽快速繁殖培养：将步骤（1）得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23~26℃，光照强度1400~2000lux，光照时间为10~12小时/天的条件下培养30天，顶芽分化后获得丛生芽，其中MS培养基中含0.1~0.4mg/L的KT、1.0~2.0mg/L的6-BA、1.0~2.0mg/L的NAA、20~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

（3）丛生芽壮苗培养：将步骤（2）中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中，在培养温度23~26℃，光照强度1400~2000lux，光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到健壮植株，其中MS壮苗培养基中含0.5~1.5mg/L的6-BA、0.2~0.6mg/L的IAA、20~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8；

（4）健壮植株生根培养：将步骤（3）中得到的健壮植株置于MS生根培养基中，在培养温度23~26℃，光照强度1400~2000lux，光照时间为10~12小时/天的条件下培养40天得到带根的完整植株，其中MS生根培养基中含0.5~1.5mg/L的IAA、1.0~2.0 mg/L的IBA、25~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8。

采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高，可在短期内提供大量大苞水竹叶的优质种苗，有效解决了大苞水竹叶的规模化育苗问题。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。

一种大苞水竹叶组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

（1）外植体的选择与消毒：取大苞水竹叶顶芽作为外植体，依次用2%洗洁精水溶液浸泡5~10min、线状自来水冲洗5~15min、75% 乙醇中表面消毒30~ 45 s、0.1% HgCl₂（添加了2~3滴吐温-20）消毒8~10min、无菌水冲洗3~5次，最后用消毒滤纸吸去表面水分，得到外植体，其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水；

（2）顶芽分化获得丛生芽快速繁殖培养：将步骤（1）得到的外植体接种到MS培养基中，在培养温度为23~26℃，光照强度1400~2000lux，光照时间为10~12小时/天的条件下培养30天，顶芽分化后获得丛生芽，其中MS培养基中含0.1~0.4mg/L的KT、1.0~2.0mg/L的6-BA、1.0~2.0mg/L的NAA、20~30g/L蔗糖和3.8~4.8g/L的琼脂，培养基的pH值为5.8，观察发现，培养基中6-BA和NAA浓度增加，大苞水竹叶丛生芽数均增加；结果，在培养基中添加0.2mg/L的KT、2.0mg/L的6-BA和1.5mg/L的NAA丛生芽效果最好。

表1 不同激素对大苞水竹叶组织培养快速繁殖效果的影响