[发明专利]一种饲料添加剂中纽甜含量的高效液相色谱测定方法

说明书

技术领域

本发明属于饲料添加剂中成分分析检测技术领域，具体涉及一种饲料添加剂中纽 甜含量的高效液相色谱测定方法。

背景技术

高效液相色谱法是一项高压、高效、高灵敏度的分离技术，可用于分离分析高沸 点、相对分子量大、难挥发的有机化合物，广泛应用于化学、化工、高分子、生物、食品、医药 等领域。

纽甜，化学名称是N-[N-(3,3—二甲基丁基)-L-α-天冬氨酰]-L-苯丙氨酸-1-甲 酯，白色结晶粉末，含约4.5％的结晶水，是一种功能性甜味剂，其具有纯正的甜味，甜味协 和，十分接近阿斯巴甜，没有其他强力甜味剂常带的苦味和金属味，甜度比蔗糖甜7000～ 13000倍，比阿斯巴甜甜30～60倍，纽甜在常温(25℃)下水中的溶解度为12.6g/L，此溶解度 能完全满足正常的生产需要。

在饲料添加剂领域，纽甜纯净的甜味，没有苦、涩、金属的异味，可有效地遮蔽糖精 的后苦等特征，因而纽甜可用于配制饲料甜味剂，通常将纽甜以及其他有效成分加入到二 氧化硅和/或蛭石等载体中混合均匀制备成所需产品。然而，目前饲料添加剂中纽甜含量的 检测没有国家标准，也没有现成的方法。《GB/T29944-2013食品安全国家标准食品添加剂 纽甜》规定了食品中纽甜含量的检测方法，但其不适用于混合型饲料添加剂中纽甜含量的 检测，该标准适用于以阿斯巴甜和3,3-二甲基丁醛为主要原料，在氢气存在下甲醇溶液中 进行反应而制得的纽甜，采用高效液相色谱法外标单点进行定量，适用于大浓度下纽甜含 量的检测，而饲料添加剂中纽甜含量低，采用该标准检测产生的误差大，故不能用于饲料添 加剂中甲酸的定量测定。《GB/T23378-2009食品中纽甜的测定方法高效液相色谱法》，该标 准提供了一种定量检测纽甜的方法，但该方法在样品处理过程中采用固相萃取柱，过程复 杂，工作量大，不适用于大批量检测；流动相采用走梯度方式，液相采用二元泵，而对于液相 只有单泵的企业，并不适用。

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明所要解决的技术问题是：怎样提供一种饲 料添加剂中纽甜含量的高效液相色谱测定方法，使其能够对饲料添加剂中纽甜含量进行精 准定量，且具有无需进行复杂的前处理、检测灵敏、高效、准确和稳定的特点。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：一种饲料添加剂中纽甜含量 的高效液相色谱测定方法，包括如下步骤：

1)配制梯度浓度的纽甜标准溶液；所述纽甜标准溶液以水作为溶剂；

2)采用液相色谱法对步骤1)配制的纽甜标准溶液进行检测，计算得到纽甜出峰的 峰面积，以纽甜标准溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；其中，色谱条件 为采用C₁₈液相色谱柱，检测波长210nm，流动相为pH3.5～4.0的庚烷磺酸钠、三乙胺和乙腈 的混合水溶液，庚烷磺酸钠、三乙胺、乙腈和水的质量体积比为2.6～3.4g：3～4.5mL：300～ 450mL：500-650mL；

3)将饲料添加剂加入水中，并进行超声处理，得到样品处理液；

4)将步骤3)得到的样品处理液在与步骤2)相同的液相色谱条件下进行检测，计算 得到纽甜出峰的峰面积，根据步骤2)建立的标准曲线计算出样品处理液中纽甜的浓度，并 结合所述样品处理液的体积和样品重量，计算出所述饲料添加剂中纽甜的含量。

相比现有技术，本发明具有如下有益效果：

1、饲料添加剂中纽甜含量较少，针对现有的国家标准仅适用于大浓度下纽甜含量 的检测，而并不适用于饲料添加剂中纽甜含量的检测，且前处理方法过于繁琐等不足之处， 本发明考虑到纽甜的特性，并根据饲料添加剂样品中各成分组成的性质，选择C₁₈柱作为固 定相，并通过创造性的研究得出适用于本发明饲料添加剂分离的色谱条件，使得各成分在 该色谱条件下能充分分离开，在检测波长210nm条件下纽甜能够稳定出峰，相较于现有技术 更短时间内即可出峰，出峰不会拖尾、重叠，不会有干扰峰出现，进而使本发明检测结果精 确，可靠性高。

2、本发明先对不同浓度的纽甜标准溶液进行检测，避免了单点计算带来的误差， 进而使检测结果更加准确、可靠，制得的标准曲线相关系数更高，为后续样品的检测奠定了 可靠的定量基础。